• Forum - Sonde, ADN, Technique

[Biologie Moléculaire] Technique d'hybridation

Quel est le nom svp de la technique qui utilise l'hybridation d'une sonde d'ADN monocaténaire sur des ARNm séparés par électrophorèse.  [...] je pense que cette technique est le northern blot c'est à dire le transfert d'ARN sur membrane de nitrocelluloseou nylon à partir d'un gel d agarose, par capillarité suivie d'une étape d'hybridation à ADN complémentaire et c'est là qu'intervient la reverse transcriptase car c'est une enzyme qui permet à partir d'un ARN d'obtenir un ADN complémentaire.  [...]

dot blot- southern blot

Le southern est une technique de mise en évidence d'une séquence d'ADN. Il suffit de faire migrer l'ADN sur gel d'agarose, ensuite on fait une migration sur membrane, puis une révélation avec une sonde marqué.  [...] Cette technique a été mis au point par monsieur Southern, par la suite, pour la recherche des ARN et des protéines, le northern et southern ont été mis au point, et le nom est donc une blague par rapport au nom de Southern.  [...]

[Biologie Moléculaire] Marquage d'une sonde

Sinon au niveau de la nick translation et de la technique du PCR, lorsqu'on met la polymérase, on sait pas à combien de bases elle va arrêter de transcrire le brin matrice Donc à la fin de ces deux techniques, il y aura pleins de fragments de tailles variables dans le tube De plus la longueur de la sonde va varier puisque la polymérase lorsqu'elle va créer les sondes (en supposant qu'on veuille faire plusieurs sondes pour un même brin matrice) elle ne va pas toujours s'arrêter aux mêmes endroits.  [...] Au final, si on révèle tout ces brins sur une technique sur gel d'agarose par autoradiographie, on va avoir des bandes autoradiographiques partout non, puisque le poids moléculaire des sondes formées seront différentes Et au final comment alors on peut connaître la taille de l'ADN matrice puisque sur le gel d'agarose on a la taille de la sonde + celle de l'ADN sur lequel la sonde s'est accroché.  [...]

Marche sur le chromosome

c'est pour utiliser la technique que tu as besoin d'info car j'ai deja fait un peu de marche sur le chromosome donc si tu as des question precise hesite pas.  [...] disons, lors de cette technique on utilise une sonde et cette sonde peut tomber sur l'ADN répété et comme on a des clones qui sont hybridés et hybridés entre eux dans d'autres endroits.Cela va probablement couper la marche.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rflp

D'accord merci donc si je comprend bien la technique du southern blot ne demande pas forcément de cliver les brins par une enzyme de restriction. La sonde peut hybrider directement les brins d'adn dans ce cas.  [...] Par contre pour révéler les fragment de RFLP on peut également utiliser la technique du southern par hybridation des fragment d'adn avec des sondes. Est ce que c'est bien ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] marquage de sonde à la DIG

j'ai préparé une sonde ADN marquée aux dUTP-DIG en utilisant la technique de random priming (avec des hexamers) avec le fragment de Klenow.  [...] Je me demandait pourquoi le fragment de Klenow et d'autre part est ce qu'il aurait été possible de fabriqué cette sonde par PCR avec une Taq polymérase classique.  [...]

[Biologie Moléculaire] détection de gènes multicopies

Tout d'abord j'avais penser faire une digestion de mon adn, puis faire migrer, suivi d'une hybridation avec une sonde radioactive et j'aurais alors pu voir si une ou plusieurs bandes s'allumaient. Malheureusement cette technique nécessite une grande quantité d'adn que je n'ai pas.  [...] Et je pense aussi que la technique ne marche pas pour un trop grand nombre de copies ou la présence de copies trop rapprochées puisque la résolution de la technique n'est pas au nucléotide près.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'hybridation d'une sonde

Une sonde est une séquence d'ADN ou d'ARN qui va se fixer in vitro ou in situ sur sa séquence complémentaire. Cela est utilisé pour différentes techniques comme le Northern Blot pour quantifier une séquence d'intérêt ou comme en hybridation in situ pour déterminer la localisation de cette séquence dans une cellule par exemple.  [...] Une sonde est une séquence d'acides nucléiques qui est complémentaire à un brin d'ADN mono-caténaire que tu souhaites marquer. C'est à dire que les bases nucléiques de la sonde et celle de ton ADN d'intérêt sont complémentaires. (par exemple, chaque fois qu'il y aura un C dans ton ADN, il y aura un G dans ta sonde, et inversement...).  [...]

[Biochimie] Différence entre puce à ADN et sonde à ADN !

[Biochimie] Différence entre puce à ADN et sonde à ADN.  [...] Re. Différence entre puce à ADN et sonde à ADN.  [...]

[Biologie Cellulaire] Exercices important!!

ce fragement est utilisé comme sonde ds une expérience de southern blot sur l'ADN génomique totale a partir duquel cette sonde avait été générée.  [...] question. sachant que vous souhaitez obtenir 80 colonies par boite, expliquez comment vous réaliser cette expérience (protocole de dilution utilisé, volume déposé sur la boite de petripour l'étalement).   [...]