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[Biologie Moléculaire] Causes d'échecs de la production de protéines recombinantes

Sinon il n'y a pas trop de solution miracle. Il existe un produit commercial qui aide à sortir les protéines de ces corps d'inclusion.  [...] Sinon il n'y a pas trop de solution miracle. Il existe un produit commercial qui aide à sortir les protéines de ces corps d'inclusion. -. pourrais tu me donner plus d'information à ce sujet.  [...]

IMPORTANT : Désoxycholate de sodium

j'ai déjà posé une question au sujet de l'extraction du cytochrome c. Pour rappel, à la suite d'ajout de TCA, le cytochrome devait précipiter sous forme de flocons rouges ce qui ne s'est pas produit.   [...] J'ai trouvé qu'il était possible dans le cas de présence de peu de protéines dans une solution de les extraire à l'aide de désoxycholate de sodium. Cela formerai des misselles.  [...]

IMPORTANT : extraction cytochrome c

Bonjour à tous, nous sommes dans une manip d'extraction de cytochrome c d'un coeur de boeuf. Nous avons déjà nettoyé la solution du reste des protéines à l'aide de sulfate ammonique. Nous avons atteind un pH de 7 d'où nous n'avons pas tocuhé au cytochrome c.  [...] Après centrifugation, nous avons acidifié le surnageantà pH 3.4 à l'aide de TCA. En effet, le cytochrome c oxydé est moins solublé dans le sulfate ammonique et devrait précipiter sous forme de flocons rouges.  [...]

[Biotechnologie] méthode de Bradford

J'ai une toute petite question sur le principe de cette méthode. Lorsqu'on veut par exemple quantifier les protéines d'une solution à l'aide d'une gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie. Où met on le Bradford est ce qu'il est sur toute la plaque de micotitration ou bien il doit être mélanger dans chaque puits avec le sérum albumine et notre solution à titrer.  [...] Et si j'ai bien compris la gamme de sérumalbumine bovine prédéfinie va réagir avec le Bradford qui aura une coloration de plus en plus intense plus la concentration sera élevée, en comparant avec notre solution à doser qui elle aussi à réagit avec le bradford et va donner une certaine coloration, on saura donner la concentration en proteine de la solution à doser en fonction de son intensité en bleu Ai-je bien compris.  [...]

Courbe Henderson protéine expérimental vs théorique vs acides aminés libres

Bonsoir à tous, je me permets de vous demander votre aide concernant un tp de Biochimie au cours duquel j'ai titré une solution d'azidometmyoglobine à l'aide de NaOH et de HCl, puis une solution contenant tous les acides aminés de la protéine sous leur forme libre, afin de comparer les courbes d'Henderson.  [...] J'aurai au final, besoin que l'on m'aiguille un peu concernant mon interpretation de ce graphique, je sais que les pKa des aa varient en fonction de leur environnement électrostatique, mais je ne sais pas comment expliquer pourquoi ils basculent vers des valeurs plus basiques.   [...]

précipitation des protéines

en fait la précipitation des protéines arrive lorsqu'il y a une faible solubilité de la protéine dans la solution. En concentration faible de sels dissouts dans la solution, (donc faible force ionique) les sels interagissent avec les radicaux des protéines et aident à leur dissolution, or qu'en forte concentration saline, tout change, en effet, il n'y a plus assez de éluant (pris par les sels) donc les protéines se regroupent, on dit qu'elles précipitent (relargage).  [...] je pense qu'il ne s'agit pas de saturation de protéines (jamais entendu parlé) mais de la solution, et dans ce cas, c'est une saturation en sels, c'est à dire, une solution à grand taux de soluté.  [...]

[Biochimie] test bradford et acides nucléiques

le principe est le suivant. on a 3 solutions dont une solution d'acides nucléiques que l'on soumet au réactif de bradford dont le but est la mise en evidence de protéines (en présence de protéines il vire au bleu).  [...] ainsi, dans ma solution protéique on observe bien une coloration bleue. Cependant, on observe également une légère teinte bleue au niveau de ma solution d'acides nucléiques. Par conséquent j'aurai souhaité savoir quels protéines pourraient être associées à ces acides et dont présentes dans ma solution.  [...]

Dosage des macromolécules biochimiques

.Pourquoi si ce rapport est. à 1,7 la solution d'acide nucléique est surement contaminé par des protéines et quand il est de 1,8 à 2, cette solution est pur.  [...] Sinon, de manière expérimentale, il suffit de préparer des solutions d'ADN + protéines en proportion variable et de mesurer en spectro ce que ça donne.  [...]

[Biochimie] Détection des proteines d'une solution acqueuse.

Je dois élaborer un test afin de détecter et quantifier la présence de proteines et d'acide aminés libres dans une solution acqueuse.  [...] c'est le bleu de coomassie, un colorant, qui absorbe à 595nm lors de sa complexation avec les protéines (residus aromatiques et hydrophobes je crois).  [...]

[Biochimie] pH protéines hydrosolubles animales

Le pH des protéines hydrosolubles n'a pas d'importance dans la solubilisation des protéines. Il faut simplement être dans un tampon permettant de maintenir les protéines en solution.  [...] Comment pourrai-je vérifier que les protéines d'intérêt sont bel et bien dans ma solution Par un dosage par la méthode de Bradford par exemple.  [...]