• Forum - Sodium, Cadre, Tampon, Extraction

Na-bisulfite (NAHSO3) , rôle ???

Je ne l'ai jamais utilise dans le cas d'extraction d'ADN, mais dans le cas de purification/extraction de proteines. Il agirait comme anti-oxydant.  [...] J'ignore le rôle du bisulfite de sodium dans le cadre d'un tampon d'extraction. Je voulais juste signaler qu'il pouvait aussi être utilisé pour une mutagenèse. d'où l'intérêt de remplacer C par U pour introduire des mutations ponctulelles.  [...]

[Biochimie] Extraction enzymes

Pour réaliser l'extraction des enzymes de l'orge, j'ai procédé à un broyage de grains d'orge avec de l'eau distillée puis à une filtration et enfin une centrifugation pour récuperer les enzymes.  [...] Un tampon est généralement mieux car il permet de limiter les variations de pH qui pourraient dénaturer l'enzyme au cours de l'extraction. D'autre part, il peut y avoir dans les tampons des inhibiteurs de protéases ou autres agents assurant la stabilité de l'enzyme car une extraction met la protéine recherchée en présence de composés nocifs pour la protéine.  [...]

[Biologie Cellulaire] etude du niveau de phosphorylation d'une protéine en WB

Quels sont les meilleures conditions pour l'extraction et pour voir une différence de phosphorylation en western blot.  [...] Pour l'extraction, si tu veux conserver les phosphorylations de ta protéine, il faut de l'orthovanadate de sodium (inhibiteur de phosphatase) dans le tampon et éventuellement d'autres inhibiteurs. Mais surtout garder les échantillons dans la glace le plus possible une fois l'extraction faite, cela limite d'autant plus les déphosphorylations.  [...]

[Biologie Moléculaire] kinase

Un test que tu peux tenter juste pour savoir si ta proteine est phosphorylee et dans le cas ou tu peux immunoprecipiter ta proteine est de faire une immunoprecipitation dans differente condition de stringence et incuber ton immunoprecipitation dans un tampon de reaction adequate pour les kinases avec de l'ATP32.  [...] D'une maniere generale, lorsque tu cherches a montrer une phosphorylation, tu utilises des anti-phosphatases dans ton tampon d'extraction de la proteine ou de lyse des cellules. Rien ne t'empeche de l'utiliser dans ton lysat de reticulocyte. Celui utilise est souvent l'orthovanadate de sodium, tres efficace et spectre tres large.  [...]

[Biochimie] Purification d'une proteine acide

bonsoir quelqu'un peut m'aider a comprendre une technique de purification d'une proteine acide intracellulaire. Le protocol de purification est le suivant.   [...] 9- Récuperation des fraction actives non retenues, et dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,01M pH5.  [...]

[Microbiologie] tampon phosphate

Pour une solution tampon à pH 5 je te conseil plutôt un tampon acetate (mélange d'acide acitique et d'acetate de sodium) avec la même logique de mélanger les deux au pHmètre.  [...] Et il suffit d'une minute de google pour soit trouver un protocole pour préparer un tampon, soit pour se rendre compte que ça n'est pas une bonne idée. Au moins je l'aurais mis sur la voie.  [...]

Préparation solution tampon phosphate

Bonjour à tous je vous sollicite pour une petite question concernant la préparation d'un tampon phosphate. Je m'explique, j'ai une solution de sodium phosphate monobasic (NaH2PO4) à 1M et une solution de sodium phosphate dibasic (Na2HPO4) à 1M et je dois faire un tampon phosphate en mélangeant les 2 pour obtenir une solution à 1M pH 7,2 à 4°C.  [...] pour ce que ça devrait bouger (a vérifier) je ferai le mélange donné a 25°, (dans un volume un peu moins grand), j'ajusterai au HCl ou NaOH en fonction et compléterai le volume. Ça doit pas être loin.   [...]

Hybridation in Situ

- à quoi sert le SSC (saline sodium citrate) Si j'ai bien compris, c'est une solution tampon, mais juste après ça, j'ai une incubation de 30 minutes dans un tampon Tris/glycine, donc je ne comprend pas bien la différence entre les 2.  [...] - L'appariement plus ou moins spécifiques entre acides nucléiques (ici, entre la sonde et l'ARN) dépend de plusieurs conditions (pH, sels, température), le tout est appelé stringence. Le SSC permet de jouer sur la stringence (en jouant sur le pH / concentration en sels) qui ne doit pas être trop forte (laison trop difficile, manque de signal), ni trop faible (trop de liaison, signal aspécifique).   [...]

Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.  [...] Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -. mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire le noyau devient tout petit et finit par éclater aussi.  [...]

préparation de l'invertase

j aimerai bien savoir le rôle de chacun du tampon de citrate et le mélange toluène/éthanol dans la préparation de l'invertase à partir la levure de boulangerie.  [...] ils interviennent après avoir broyer la levure dans un tampon réfrigéré de citrate de sodium.  [...]