• Forum - Sites, Restriction, Plasmide

Carte de restriction

Qu'est-ce qu'une carte de restriction Reportez les résultats sous forme linéaire en indiquant les sites de restriction pour le plasmide A et B.  [...] Le même exercice donnera 4 cartes avec le plasmide B. Le positionnement adéquat des 3 sites de restriction dans le plasmide B génère 4 cartes de restriction possibles dont les 3 fragments de 500, 1000 et 2000 pb permet déjà d'exclure la proposition de Naomie avec son agencement initial en 5'-2000/500/1000-3' (3 sites de restriction aux positions 1, 2000 et 2500 (ou bien aux positions 278, 2278 et 2778, comme vous voulez...)).  [...]

PCR, template et riz anti-alzheimer

3) La découpe aux sites de restriction permet a) de récupérer le gène AB d'intérêt et b) de l'insérer dans les mêmes sites de restriction sur le plasmide commercial.  [...] 3) les sites de restriction permettent en effet que les extrémités de tes morceaux soient cohésives. Donc on peut extraire un fragment entre certains sites, et si on choisit bien son plasmide receveur, l'insérer de facon orientée.  [...]

plasmide et BAMH1

Tu as un plasmide recombinant donc il possède le gène. Une fois qu'on l'a, on met l'enzyme Bam H I. Sur le plasmide recombinant il y a donc 3 sites de restriction Bam HI. celui du plasmide seul et les 2 du gène qui est dans le plasmide. Donc trois coupures.  [...] Et l'intérêt est là. tu cherches parmi tes plasmides lesquels sont recombinants et lesquels ne le sont pas. Tu as ton plasmide, tu le mets avec l'enzyme et tu fais une petite électrophorèse. si tu as 1 seul gros fragment, ton plasmide était sans le gène, si tu en as 3, le plasmide contenait le gène.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

je crois que je confonds les sites de restriction pr ésent sur le plasmide et les enzymes de restriction que l'on ajoute aux amorces pour faire la PCR.  [...] Elles permettent notamment en génie des vecteurs, d'ouvrir un plasmide, et d'y insérer un gène YFG dont les extrémités sont construites pour etre complémentaires avec le site de restriction pour que cela colle pile poil.  [...]

[Biologie Moléculaire] comment faire une mutation par PCR?

Enfin, par simple clonage, on insère le résultat de cette pcr dans le plasmide initial grâce aux sites de restriction unique.  [...] ok, alros pour mes amorces 3 et 4 il faut que je fasse attention a chevaucher un site de restriction de preference a bouts francs pour une fois mon doublet final obtenu pouvoir le remettre dans mon plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Numérotation des sites de restriction

Bonjour à tous j'aimerais savoir comment on numéroté les sites de restriction sur un plasmide. Je dois numéroter les sites de restriction de l'insert d'un plasmide recombinant et je ne sais pas comment faire. Merci d'avance pour la réponse.  [...] Je n'ai pas compris votre réponse. Je vais essayer d'expliciter ma question. En fait j'ai un plasmide psp72 et un insert pst1 et entre le promoteur sp6 et le site de restriction pst1(l'insert) il y'a un écart ce qui est normal. Mais le site de restriction pst 1 porte le numéro 32 et je n'ai pas compris comment le prof a trouvé ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Une fois ta PCR faite, tu digères tes fragments avec les 2 enzymes et pareils avec ton plasmide. Quand tu choisis tes sites il faut que tu vérifies l'ordre dans lequel les sites de restriction sont pr ésents sur le plasmide. Dans notre cas, il faut que EcoR1 soit avant HindIII et le tout après le promoteur déjà pr ésent sur le plasmide (sinon ton insertion se fera à l envers). Donc il faut que ton plasmide ait.  [...] fin de ta sequence-HindIII-NNNN), ceux ci désignent des bases qui peuvent éventuellement séparés les 2 sites de restriction sur ton plasmide qui ne sont pas forcément côte à côte.  [...]

[Biologie Cellulaire] Enzyme de restriction

Le plasmide X2R contient dans sa séquence 2 sites de restriction BamH2 et 2 sites de restriction Sif1. J'obtiens deux fragments d'ADN après traitement du plasmide par BamH2. Cela signifie que.  [...] J'ai noté la question telle quelle, aucune info sur la taille, rien du tout... Donc non je ne comprends pas. Il nous a posé deux questions sur les enzymes de restriction et la deuxième je ne la comprends pas plus. Mais malheureusement je ne l'ai pas sur moi à l'heure actuelle, je posterai un autre message quand je l'aurai.  [...]

[Biologie Moléculaire] mutagènese, transformation, transfection

Ce que je comprends c'est que vous avez fait une mutagénèse dirigée par PCR à partir d'un plasmide X. Pour éliminer le plasmide matrice X vous avez utilisé la spécificité de l'enzyme de restriction DpnI pour les sites méthylés. Ainsi, l'enzyme a digéré le plasmide matrice, produit en bactérie (donc méthylé) et pas le plasmide produit par PCR, non méthylé.  [...] Pour vérifier une mutagénèse sur un petit insert (d'un ordre de grandeur inférieur au 10Kb) le plus simple est de faire quelques restrictions et un séquençage. Vous n'avez pas fait de séquençage du Bluescript.  [...]

[Biochimie] Plasmide de clonage et d'expression

je suis à la recherche d'un professeur de biochimie ou une personne pouvant me dire concrètement comment distinguer par l'intermédiaire d'une carte de restriction si [un plasmide est dit de clonage ou d'expression.  [...] Ces deux types de plasmides ont des caractéristiques communes et des différences. La simple carte de restriction, qui présente les sites de restriction (généralement limitée aux sites présentes une seule fois dans le plasmide) ne suffit pas à les distinguer.  [...]