• Forum - Sites, Restriction, Enzyme, ADN

[Biologie Moléculaire] carte de restriction?

C'est la position des sites de restriction d'une enzyme sur la séquence d'ADN digéré.  [...] Sara789, aurais-tu oublié les règles basiques de politesse.   [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je mal à comprendre comment peut on jouer sur les séquences, et faut il toujours commancer par le triple ATG des amorces pour faire la PCR et la place de la PCR dans la vérification de l'intégrité des plasmides.   [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Bonjour, est ce que quelqu'un aurait une idée sur comment vérifier l'efficacité de la digestion enzymatique par les enzymes de restrictionest ce par électrophorèse.  [...] Lorsqu'une enzyme de restriction a efficacement digéré un ADN, cet ADN est coupé en un ou plusieurs sites. Comment vérifier qu'un ADN est coupé Cette technique fonctionne-t-elle quelque soit mon type d'ADN (génomique, plasmidique, produit de PCR, etc.).  [...]

TP biochimie: introduction aux méthodes utilisées en génie génétique

ok alors sur tes 3 plasmides tu as un ou plusieurs sites de restriction à EcoRI c'est un site que va reconnaître ton enzyme EcoRI et va donc couper ton ADN plasmidique à cette endroit précisément. Tu connais la taille de tes plasmides en pb et tu sais sur quel pb se situe le site de restriction.  [...] Donc à partir de là tu peux calculer les différents fragments obtenus après clivage de l'enzyme. De plus tu as des fragments de taille différente notamment un ADN linéarisé je pense que c'est peut-être aussi pour voir quel taille d'ADN exogène est capable d'incorporer une bactérie transformante.  [...]

Technique "REMI"

Je ne comprends pas la technique REMI. Restriction Enzyme Mediated Integration, quelqu'un pourrait t'il me l'expliquer.  [...] On mélange de l'ADN plasmidique linéarisé avec une enzyme de restriction, celle-ci est capable de générer des extrémités cohésives compatibles dans le génome. Par la suite, cette enzyme stimule l'intégration de cet ADN dans les sites de restriction apparentés dans les chromsomes, souvent en une seule copie qui provoque que très peu de dommages dans le génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

je crois que je confonds les sites de restriction présent sur le plasmide et les enzymes de restriction que l'on ajoute aux amorces pour faire la PCR.  [...] pour le protocole de clonage, la première étape est la création d'une banque d'adn (extraction adn, digestion par une enzyme de restriction puis ligation de ces fragments dans des plasmides portant les sites de restrictions de l'enzyme restriction choisie).  [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

Après de nombreuses recherches, voilà ce que j'ai compris. les enzymes de restriction ont la faculté de couper la molécule d'ADN à des endroits spécifiques. Par exemple, une enzyme va couper entre G et A, c'est le site de restriction. Si on prend deux fragments de molécule d'ADN de deux individus différents.  [...] L'ADN est toujours susceptible d'être couper par des enzymes de restriction s'il n'est pas protégé. Les enzymes de restriction sont des outils utilisés pour couper l'ADN en des sites bien précis, Ces enzymes sont des endonucléases.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

En bref l'enzyme de restriction va permettre le clivage de l'ADN par rapport au site de restriction. Ensuite les fragments d'ADN sont séparés (ou différenciés) par électrophorèse.  [...] Et ensuite il y a l'étape de l'insertion du fragment d'ADN, clivé par l'enzyme de restriction qui sera inséré dans un plasmide ou un vecteur.  [...]

Enzyme de restriction

Bonsoir, lorsqu'on fait une carte de restriction, l'ADN (en rond) c'est bien celui de l'enzyme.  [...] Je crois qu'il y a confusion. Comment vois-tu une enzyme de restriction Quelle action de l'enzyme de restriction regardes-t-on lorsqu'on effectue la carte de restriction d'un plasmide Pour information, ce qui est représenté sur une carte de restriction ce sont les sites de coupure par des enzymes de restriction, et non pas les enzymes de restriction elles-mêmes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

il faut couper le vecteurs par un enzyme de restriction ensuite il faut inserer les meme sites de restriction autour de la sequence d'adn qu'on veut afin qu'on integre la sequence dans le vecteur.  [...] Hormis certaines remarques faites ci haut,on doit prendre aussi en compte le fait que le clonage depend de l'objectif du travail.Si par exemple on veur cloner l'ORF tout entier,on fait le choix de 2 sites de restriction enzymes teste au prealable car les 2 sites,il ne faut pas que ils se retrouvent dans le gene,en plus pour l'orientation du gene et aussi en fonction de disponibilite des enzymes de restriction au laboratoire.  [...]