• Forum - Sites, Fixation, Anticorps

[Biologie Moléculaire] Technique du Western Blot

Dans mon cours j'ai noté que lors du transfert sur un filtre de nitrocellulose, il fallait saturer les sites de fixation de l'anticorps.  [...] Le blocage des sites de fixation non spécifique des anticorps aux protéines que tu as transféré sur la membrane peut aussi se faire si nécessaire mais c'est différent.  [...]

anticorps et récepteurs???

Est ce qu'un anticorps produit par un plasmocyte possède 4 sites de récepteurs ou seulement 2, svp.  [...] Un anticorps possède 3 sites de fixation. 2 spécifiques à l'antigène et 1 spécifique à un phagocyte pour l'élimination des antigènes.  [...]

[Immunologie] VIH et CPA

On pourrait penser (mais il doit y avoir des limites a ce procédé) que injecter une souche morte pourrait déclencher une réaction immunitaire (phagocytose, création d'anticorps...), les virus étant morts, ils ne pourraient se défendre, et on peut imaginer selon un schéma logique que des macrophages deviendraient CPA (cellules présentant l'antigène) et que l'organisme trouverai seul des anticorps appropriés,  [...] le corps créé des anticorps aléatoires il me semble, avec des sites de fixation d'antigène (paratope) de structure aléatoires pour. au cas ou un de ces anticorps fixerais une protéine de l'antigène,  [...]

[Biochimie] La BSA

La BSA est utilisée, comme dit Yoyo, pour le blocage des sites aspécifiques lors du Western, aussi pour faire des gammes étalon lors de certains dosages (Bradford), aussi je l'ai utilisée pour diminuer mon bruit de fond lors d'hybridation sur microarray, parfois elle peut être aussi utilisée en tant que témoin de charge (dans des gels).  [...] il me semble qu'on l'utilise également en immunofluo (comme pour le western, pour saturer les sites non spé de fixation des anticorps).  [...]

[Immunologie] Anticorps complet et incomplet

Un anticorps complet est capable de provoquer une réaction d'agglutination. Ce terme s'utilise notamment pour qualifier les agglutinations d'érythrocytes (IgM dirigées contre les antigènes des groupes sanguins).  [...] Et les anticorps incomplet, sont des anticorps ce fixant sur des cellules portant l'antigène sans les agglutiner (Ex. IgG dirigées contre des antigènes de surface des érythrocytes). L'absence d'agglutination est due au fait que les deux sites de fixation antigénique s'attachent à la même cellule (et pas au fait que l'anticorps est imparfait ou monovalent).  [...]

[Biologie Moléculaire] Hybridation in situ et digoxygénine

Fixation au formaldéhyde (+ coupes si l'organisme n'est pas étudié in toto ) =. Perméabilisation (traitement à la protéinase K) =. Hybridation (ajout de la sonde ARN complémentaire) =. Lavage (élimination des sondes qui ne complémentent pas) =. Saturation des sites anticorps anti-digoxygénine =. Révélation (phosphatase alcaline etc.).  [...] On réalise la saturation avant d'ajouter l'anticorps. donc ici avant d'ajouter l'anticorps anti-dig (qui est le seul anticorps que tu ajoutes). dans une immuno avant l'anticorps primaire.  [...]

[Méthode d'étude] Immunochimie : Etape de contrôle.

En gros, chaque anticorps peut se fixer sur la cible attendue (c'est que l'on appelle un marquage spécifique) et/ou sur des cibles inattendues (c'est que l'on appelle un marquage aspécifique). En général, l'affinité de l'anticorps est largement supérieure pour sa cible (il est fait pour reconnaitre cette cible) que pour ses sites de fixation aspécifique.  [...] Pour la bruit de fond, il s'agit du signal aspécifique observé, c'est une propriété du signal, c'est ce que j'ai appelé le bruit du signal. L'anticorps non immun est supposé se fixer nul part. Sa fixation est toujours considéré comme aspécifique. Ainsi, en utilisant le même isotype que l'anticorps primaire, on suppose que l'on va reproduire le bruit de fond généré par l'anticorps primaire (personnellement je trouve ce contrôle assez aléatoire et plutôt trompeur au final.  [...]

[Biochimie] Analogie entre le TIF et le PSP

Toutes fois je me demande si vu l'analogie structural (pour le squelette de carbone) si les sites de fixation des deux ligands ne sont pas les mêmes.  [...] En fait je ne sais pas précisément à quoi ressemble les sites de fixation sur la SAB, j'ai juste calculer leur nombre par le graphique de scatchard, en gros on mesure le nombre de ligand qui se fixent au max sur un nombre connu de SAB pour savoir combien on a de ligand par SAB.  [...]

Test ELISA ??

On incube et on fait un lavage, on ajoute un 2 eme anticorps marqué donc anticorps anti anticorps marqué. Incubation lavage. On ajout des substrat coloré, et ceux ci vont réagir avec l'enzyme on obtiendra un produit coloré, qu on mesura la densité optique.  [...] ton test sert à quantifier la fixation d'une molécule sur un récepteur. C'est un test de compétition. on utilise un anticorps primaire dirigé contre le site sur lequel on souhaite évluer la fixation de la molécule. Si l'Ac I se fixe, la molécule ne se fixe pas et inversement.  [...]

[Génétique] Retard sur gel

Donc en gros si tu as un systeme purifie ADN + proteine pure, tu as une bande si aucune fixation (ou fixation hyper forte et tout l'ADN est retarde), une ou deux bandes si tu as au moins un site de fixation de ta proteine. Attention, tu peux avoir plusieurs sites de fixations et seulement 2 bandes voire une seule (par exemple si l'affinite est si grande que tu ne peux voir les etats intermediaires).  [...] En gros les retards sur gel sont assez chiant a interpreter, c'est pour ca que tu dois faire une piste d'ADN sans proteine, et differentes concentration de ta proteine. Sinon tu ne peux pas conclure grand chose.   [...]