• Forum - Sites, Enzymes, Restriction

Mémoire en génétique : questions diverses

Après de nombreuses recherches, voilà ce que j'ai compris. les enzymes de restriction ont la faculté de couper la molécule d'ADN à des endroits spécifiques. Par exemple, une enzyme va couper entre G et A, c'est le site de restriction. Si on prend deux fragments de molécule d'ADN de deux individus différents.  [...] L'ADN est toujours susceptible d'être couper par des enzymes de restriction s'il n'est pas protégé. Les enzymes de restriction sont des outils utilisés pour couper l'ADN en des sites bien précis, Ces enzymes sont des endonucléases.  [...]

[Biochimie] Preparation et analyse de plasmides

* Les enzymes que tu cites, HindIII et EcoRI, sont appelées enzymes de restriction. Elles vont reconnaître des endroits particuliers au sein de l'ADN. des sites de restriction (des séquences palindromes, il y a une discussion dessus, si je ne m'abuse, donc regarde ).  [...] * Dans l'analyse par électrophorèse, tu vois des choses différentes en fonction de la conformation de ton ADN. Ainsi, dans le cas simple où on utilise de l'ADN linéaire (ton plasmide en morceaux après la digestion par les enzymes de restriction), plus c'est bas, plus c'est petit.  [...]

[Biologie Moléculaire] polymorphisme/mutation???

Les SNP et RFLP, mais également mini- et micro-satellites sont des mutations touchant un nombre très restreint de nucléotides, entrainant donc les polymorphismes.   [...] Les RFLP (Restriction Fragments Lenth polymorphism) sont des SNP particuliers. Ils touchent des sites d'enzymes de restriction.  [...]

[Biochimie] Rechercher sites de restriction

Déjà connais-tu des programmes online permettant de trouver les sites des enzymes de restriction connues sur une séquence donnée Quelle peut être l'utilité du programme que tu décris, s'il existe (ce qui m'étonnerait beaucoup).  [...] J'ai trouvé le programme dans lequel j'entre une sequence et je choisis une enzyme puis je récupère ma sequence avec des espaces aux niveau des sites de restrictions correspondant a l'enzyme choisie.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

2-Les sites de restriction doivent être localisé sur un marqueur de séléction. Donc si je prends comme exemple le vecteur pBR322, je peux utuliser les enzymes de restriction marquees sur la carte du vecteur, qui sont dans ce cas. PvuII, Sty I, BstZ I, Sal I, Sph I, BamH I, EcoR V, Hind III, EcoR I, Sca I, PvuI, PstI.  [...] Hormis certaines remarques faites ci haut,on doit prendre aussi en compte le fait que le clonage depend de l'objectif du travail.Si par exemple on veur cloner l'ORF tout entier,on fait le choix de 2 sites de restriction enzymes teste au prealable car les 2 sites,il ne faut pas que ils se retrouvent dans le gene,en plus pour l'orientation du gene et aussi en fonction de disponibilite des enzymes de restriction au laboratoire.  [...]

biologie moleculaire

- Des sites de clonages de restriction. avec toute une zone qui serait des sites uniques pour un maximum (en priorité les plus communes) d'enzymes de restriction. Certains vecteurs sont vendus de façon linéaire et traités de façn a pouvoir incorporé un insert sans qu'il y ait besoin de digérer avant.  [...] - Un marqueur de sélection. un moyen de repérer facilement les organismes qui ont récupéré ton vecteur. gène de résistance, marqueur d'auxotrophie, etc. Le mieux est même de placer un système qui permet de repérer en plus les organismes qui ont récupérés un vecteur portant l'insert (criblage bleu/blanc, vecteur suicide, site particulier pour une amorce, etc.).  [...]

[Biochimie] Sequençage de l'ADN

Tu vas ensuite séquencer en introduisant par complémentarité tes nucléotides et à chaque cycle tu mesures l'intensité de fluorescence... rien = pas le bon nucléotide, la fluorescence est fonction de nombre de nucléotides identiques qui se suivent sur ta séquence (c'est d'ailleurs le problème de cette méthode, tu perds la précision passé trois nucléotides identiques dessuite.).  [...] Ca dépend, les enzymes de restriction reconnaissant des sites de restrition courts, 3 bases par exemple, clivent selon un calcul probabiliste toutes les 64 paires de bases. Pour les sites de restriction de 4 bases, leur fréquence est en moyenne toutes les 256 bases.  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

Les enzymes de restriction coupent des sites spécifiques, en laissant des sites coupés spécifiques de chaque enzyme. Si les sites sont semblables, il peut donc y avoir jonction. C'est comme cela qu'on insère un gène.  [...] Même si tu peux aussi couper ton plasmide avec une ou 2 autres enzymes qui génèrent des extremités cohésives compatibles avec celles de ton insert. C'est-à-dire que tu peux avoir un site de restriction reconnu par une enzyme différente mais une fois la coupure faite, l'extremité genérée est compatible avec celle de ton enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Réparation mutation, structure Holliday

Lors de l'analyse des allèles dans une famille dans laquelle on cherche la présence d'un fragment connu, On peut utiliser 2 techniques. RFLP ou Carte de restriction, bien que je les connaisse en gros, je ne comprends pas bien pourquoi ce serait plus rapide (ou simple) avec les enzymes de restriction.  [...] La cartographie à l'aide d'enzymes de restriction est basée sur des sites de restriction sans variation, tandis que la cartographie à l'aide des RFLP est basée sur la variation des sites de restriction entre des chromosomes homologues.  [...]

[Biologie Moléculaire] clonage en phase

Les enzymes de restriction sont des endonucleases, si vous n'ajoutez pas quelques nucléarises devant votre site de restriction, ça ne coupera pas. Quand je faisais ce type de manip', j'en ajoutais six.  [...] Je rejoins Piwi sur le fait que les enzymes de restriction sont des endonucléases. Allez faire un tour sur cette page pour voir quel est le nombre de nucléotides à ajouter avant vos sites de restriction pour que la réaction soit optimale.  [...]