• Forum - Sites, Enzymes, Restriction, Séquence

PCR et clonage

on veut cloner une séquence dans un plasmide (pGEM3) coupé par 2 enzymes de restriction (enzymes utilisés pour linéariser pGEM3).mais aucun des sites qui entourent la séquence à cloner n'existe dans le site de clonage de PGEM3.  [...] 1- soit tu mets des sites de clonages en 5' dans tes oligos qui vont te permettre d'amplifier le fragment par PCR. Ensuite tu digeres le produit de PCR avec ces enzymes et tu le ligue dans ton vecteur coupé par les enzymes compatibles.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

est-ce que je dois essayer de trouver les sites de restriction des enzymes des vecteurs dans la sequences du ARNm et choisir le vecteur qui contient le plus d'enzymes dont les sites de restriction on ete trouve dans l'ARNm.  [...] il faut couper le vecteurs par un enzyme de restriction ensuite il faut inserer les meme sites de restriction autour de la sequence d'adn qu'on veut afin qu'on integre la sequence dans le vecteur.  [...]

Proteine de Fusion Besoin d'aide

j'ai donc utilisé les enzymes de restriction coupant au niveau du sites EcoRI de pGEX. afin d'inserer mon gène EGFP qui possède dans sa partie MCS, un site de restriction EcoRI egalement. mais je ne sais pas comment couper, apres le gène EGFP pour qu'il soit complementaire de la sequence de l'extremité colante correspondante sur pGEX.  [...] doit on utiliser les amorces ou doit ont couper tout simplement pEGFP-N1 a Not 1 ou XBA1 situé quelque nucleotide apres EGFP. sachant que il existe un site de restriction Not1 sur pGEX-4T-2.  [...]

[Biologie Moléculaire] carte de restriction?

C'est la position des sites de restriction d'une enzyme sur la séquence d'ADN digéré.  [...] Sara789, aurais-tu oublié les règles basiques de politesse.   [...]

Mémoire en génétique : questions diverses

- TRANSCRIPTION. ( se fait dans le noyau pour synthétiser l'ARN messager ( 1 seul brin ) qui va sortir du noyau au cytoplasme, cette transcription commence par une ouverture d'ADN par une enzyme, ARN polymerase qui va synthétiser l'ARNmessager en fait intervenir les nucléotides en complémentarité.  [...] L'ADN est toujours susceptible d'être couper par des enzymes de restriction s'il n'est pas protégé. Les enzymes de restriction sont des outils utilisés pour couper l'ADN en des sites bien précis, Ces enzymes sont des endonucléases.  [...]

[Biochimie] Linker, enzyme de restriction and co

Je n'ai pas très bien compris ce qu'était un (poly)linker. Je crois que c'est une séquence qui est reconnue par de nombreuses enzymes de restriction mais à qu'est ce que c'est précisément.  [...] Un polylinker est une région d'un plasmide contenant plein de sites de restriction, souvent uniques. Ce sont ces divers sites qui sont reconnus par les enzymes respectives. Tu peux rencontrer aussi le terme MCS, pour Multiple Cloning Site (ou Site de Clonages Multiples).  [...]

[Biologie Moléculaire] polymorphisme/mutation???

Les SNP et RFLP, mais également mini- et micro-satellites sont des mutations touchant un nombre très restreint de nucléotides, entrainant donc les polymorphismes.   [...] Les RFLP (Restriction Fragments Lenth polymorphism) sont des SNP particuliers. Ils touchent des sites d'enzymes de restriction.  [...]

[Génétique] adn et police scientifique TPE help svp !

3) Donc je pense peut-être qu'on coupe cette séquence de PCR (qui me parait pourtant déjà bien réduite) avec des enzymes de restriction pour ensuite pouvoir procéder à l'electrophorèse. Mais je sais qu'en criminalistique, on ne se sert que des introns (séquence non codante), (pour raisons éthiques) or je croyais que les enzymes de restriction étaient spécifiques aux gênes (or gêne absent sur les séquences non codantes) donc là aussi je bloque.  [...] 3) les enzymes de restriction ne sont pas spécifiques aux gènes mais à des séquences, si la séquence se trouve dans un intron, elle va couper quand même.  [...]

Acides nucléiques

Alors généralement, les sites de restriction sont palindromiques. Le motif 5' GTATAC 3' pourrait en être un du coup, car le brin complémentaire serait aussi 5' GTATAC 3'. Mais bien sûr, toute séquence palindromique n'a pas forcément une enzyme de restriction qui lui correspond.  [...] La deuxième séquence n'est pas palindromique et me paraît bien longue pour être un site de restriction. En général, deux-ci font entre 4 et 8 nucléotides.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Voilà. l'idéal, si tu peux te le permettre, c'est avoir des sites de restriction différents sur tes amorces sens et antisens, comme ça lorsque tu fais ta ligation, pas de fermeture du vecteur sans insert, et pas df'insert dans le mauvais sens. (Je pense que ton vecteur possède un polylinker.).  [...] Ça dépend des enzymes et certaines enzymes préfèrent certaines séquences à d'autres. Rien de rédhibitoire mais par exemple NotI aime bien avoir une séquence EcorRI à coté du site.  [...]