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[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Chaque enzymes de restriction reconnaît une séquence d'ADN spécifique, il s'agit d'un site particulier qui sera clivé quand l'enzyme sera présente.  [...] Une coupure de l'ADN peut être engendré soit mécaniquement ou par des agents chimiques mais dans ce cas là on coupera l'ADN de façon aléatoire on ne pourra pas prédire l'endroit où ça va se casser tandis qu'avec une enzyme de restriction on coupe l'ADN à l'endroit où sera son site de restriction.  [...]

TP biochimie: introduction aux méthodes utilisées en génie génétique

Après pour la carte plasmidique si tu sais par quelle enzyme tu fragmentes tes séquences je penses que tu peux retrouver la taille des fragments. Car si la carte plasmidique est comme une carte de génome généralement tu as des sites de restrictions dessus.  [...] ok alors sur tes 3 plasmides tu as un ou plusieurs sites de restriction à EcoRI c'est un site que va reconnaître ton enzyme EcoRI et va donc couper ton ADN plasmidique à cette endroit précisément. Tu connais la taille de tes plasmides en pb et tu sais sur quel pb se situe le site de restriction.  [...]

[Divers] la biologie générale

-transcription utilise toujours les 2 brins du gêne comme matrice, ce qui permet la production de 2 molécules de l'ARN messager différent.   [...] Parmi les séquences suivantes,qui appartient à une molécule d'ADN bicaténaire, laquelle peut etre reconnue comme le site de coupure d'une certaine enzyme de restriction*.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

[Biologie Moléculaire] Erreur de taille sur SDS-PAGE

Deuxièmement je voudrais savoir si il fallait un distance minimum de part et d'autre d'un site de restriction pour que l'enzyme clive le double brin d'ADN. Là aussi je précise mon idée. J'ai un site de restriction qui se trouve 71pb avant la fin du fragment d'ADN et je voudrais savoir si c'est possible que l'enzyme ne le vois pas.  [...] Pour le SDS je ne sais pas.Mais pour la restriction, il ne devrait pas y avoir de problème.On peut bien creer des fragment PCR avec juste un site de clivage de chaque coté et les cliver ensuite.Je sais pas si mon exemple et très clair, mais toujours est-il que je suis quasi sur que ça ne posera pas de problème.  [...]

[Génétique] Choix amorces amplification portion ADN

5' CG CTCGAG CTT AGG GTG CCA TTT AAC 3'-. amorce avec 2 nucleotides au hasard, mon enzyme de restriction, et 18 nucléotides pour donner 26.  [...] - l'enzyme de restriction reconnait une séquence (souvent palindrome ) de l'ADN, s'y fixe, mais sous quelle forme est cette enzyme ( est-ce qu elle doit etre complémentaire du brin d'ADN, ou peut importe sa forme, elle reconnait le site, s'y fixe et ne doit pas s'apparier à l'ADN).  [...]

[Biochimie] Clonage après purification sur gel

L'amplification par PCR va donner des amplicons non méthylés (et aussi ne contenant plus ta cassette vu que l'amplification du vecteur exclura la cassette). Tu ajoutes à ton produit de PCR l'enzyme DpnI qui va cliver l'ADN méthylé en fragments de quelques centaines de bases (enzyme de restriction reconnaissant un site de 4 bases méthylé).  [...] Ainsi, seul ton vecteur d'origine (celui contenant ta cassette) sera digéré par cette enzyme, et pas ton produit de PCR, ce qui te permet de bien te débarrasser de ta cassette.Cela pourrait être une stratégie de rechange par rapport à ta stratégie actuelle qui est de simplement extraire la cassette avec des enzymes de restriction correspondant à ton futur site d'insertion.  [...]

[Biologie Moléculaire] plasmide recombinant et ADN ligase

j'ai un TP de digestion enzymatique et je suis bloquée sur une question concernant la circularisation d'un fragment d'un plasmide (ce dernier a été hydrolysé par l'enzyme de restriction Agel,ensuite incubé avec la klénow en présence de 4 dNTP, ensuite digéré par EcoRV puis son plus grand fragment contenant 2 sites BglII est purifié).  [...] comment recirculariser ton gros fragment pour former un nouveau plasmide. D'un côté tu as une partie du site de restriction AgeI, et de l'autre tu as une partie du site de restriction de EcoRV. Tes bouts sont entiers... (tu n'as pas de sticky ends ) Alors, quelle enzyme catalyse la ligation de deux fragments d'ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] vecteur

j ai une serie 6 enzyme de restriction et on me demande comment faut il preparer le plasmide,par que enzyme de restriction parmi les 6(bsrDIBSALASELECORIBAMHI PSTI),et en fait j aimerai savoir comment voit on quand il y a incompatibilite entre les extremite cohesive d un fragment digéré par une enzyme (dans mon cas c est NDei)et un plasmide ouvert.  [...] L'insertion d'une séquence d'ADN bicaténaire dans un plasmide nécessite un traitement préalable par une enzyme de restriction. On choisit une enzyme qui a un site unique dans la séquence plasmidique. Après action de l'enzyme de restiction, le plasmide circulaire est linéarisé.  [...]

[bio mol] hélicase

moi je pensais sinon fabriquer un ADN double brin linéaire. contenant non loint de l'origine de replication un site de reconnaissance d'une enzyme de restriction.  [...] l'experience consiste a mettre l'hélicase et l'enzyme de restriction et on ne devrait plus avoir qu'une bande (car l'enzyme ne peut pas coupé de facon simple brin).  [...]