• Forum - Site, Restriction, Bandes

[Biologie Moléculaire] Interprétation d'un Southern Blot

J'avais d'abord pensé à une mutation ponctuelle sur le site de restriction Eco R1, mais l'homogénéité des bandes infirme cette hypothèse. Si c'était le cas, on devrait avoir une des deux bandes plus épaisses, voire la disparition de la bande de 3kb au profit de la 4kb.  [...] J'avais d'abord pensé à une mutation ponctuelle sur le site de restriction Eco R1, mais l'homogénéité des bandes infirme cette hypothèse.  [...]

Produit de PCR avant et après digestion

Une toute petite question, peut être simple pour vous. Quelle serait la différence si on met nos produit de PCR dans électrophorèse avant digestion et après digestion.   [...] Ainsi, si tu ne digères pas, tu n'auras qu'une bande, celle correspondant à ton produit amplifié. Et si tu mets à digérer, tu auras possiblement deux bandes, s'il y a un site de restriction dans la séquence amplifiée.  [...]

[Biochimie] Restriction bizarre

ou bien vu que l'echantillon 4 ne semble exister qu'en forme linéaire, il est possible qu'avec PvuII, il n'y ai pas de coupure (si la coupure pour donner la forme linéaire a été faite au niveau du site de restriction que reconnait PvuII), ou alors 2 fragments et donc 2 bandes qui migrent plus loin que la simple forme linéaire du plasmide.  [...] et pour BGIII. minimum 2 bandes (si le site ou a été coupé le plasmide est un des sites de restriction de BGIII) ou 3 bandes. Mais ou ce placeraient elles sur le gel.  [...]

[Génétique] marqueurs dominant et codominant

je un souci qui m'empêche de comprendre les caractéristiques des marqueurs moléculaires c'est en rapport avec les marqueurs dominants et codominant la définition est simple mais ce que je ne n'arrive pas à comprendre c'est comment un marqueur peut apparaître sur gel parce qu'il est codominant (2bandes)et l'autre qui est dominant n'apparaît qu'une seule bande.  [...] je pense que tu melanges pas mal de chose. Intuitivement je dirais que la mutation a l'origine du phenotype codominant cree un site de restriction donc tu vois deux bandes, alors que la mutation conférant un phénotype dominant ne le fait pas et donc il n'y a qu'une seule bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

dans le principe c'est bon, mais ensuite il faut que tu connaisses les cartes de restriction des vecteurs pour voir le sites disponibles et déterminer si tu peux faire un clonage orienté et cohésif de ton gene. Il faut aussi que tu sois plus précis, par exemple pour les bactéries, il faut que tu sois capable de déterminer si les bactéries ont intégré la construction, tu vois de quoi je parle.  [...] - Enfin on te demande de vérifier ta construction PCDNA3-GFP une fois que tu l'auras obtenue, c'est-à-dire que tu dois trouver une ou plusieurs enzymes de restriction qui te donneront un résultat différent en fonction de si tu as ton insert ou non. Par ex le choix d'une enzyme pour laquelle tu as 1 site dans ton vecteur PCDNA et un site supplémentaire dans ton insert est idéal car tu auras 1 bande = ton vecteur linéarisé si ton vecteur ne contient pas l'insert, et 2 bandes avec des poids moléculaires bien précis si tu as bien ton insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Meilleure résolution pour gel d'agarose

J'ai commandé un gène dans un plasmide avec les site de restriction qui vont bien de chaque côté et comme j'ai beaucoup de chance, il se trouve que le vecteur qu'il m'ont envoyé contient également ce fameux site de restriction. Je me retrouve du coup avec 3 bandes au lieu de 2 sur mon gel après digestion.  [...] Une autre solution vient de me traverser l'esprit. faites une mutagénèse du site de restriction qui vous embête pour le flinguer.  [...]

sonde et enzyme de restriction

Bonjour tout le monde, j'ai une petite question en génétique, alors si j'ai une sonde qui va s'hybrider avec un fragement d'adn, et il y a une enzyme de restriction qui va couper au beau milieu du fragment, du coup la partie qui était supposée s'hybrider avec la sonde, devient coupée en deux, est ce que la sonde, va s'hybrider avec une des deux petits bouts crées autrement dit si je fais une éléctrophorese j'aurai une seule bande ou bien 2.  [...] ca dépend ou s'hybride la sonde, précisément. Si la sonde recouvre tout le fragment et que le site de restriction le coupe en deux, il y a des chances pour que la sonde s'hybride avec chacun des deux fragments. En electrophorèse, vous aurez deux bandes si les deux fragments sont de taille différentes, sinon il n'y aura qu'une bande (mais deux fragments quand même).  [...]

[Biochimie] RFLP et application !

Tu as 2 allèles ayant au moins un nucléotide muté dans la séquence et qui se trouve avantageusement dans un site de coupure d'une enzyme de restriction, EcoR I si j'arrive à bien décrypter. Donc dans un cas, l'enzyme peut couper ce site, dans l'autre non.  [...] - Si elle coupe, là y a probléme, quand on a 2 bandes, je me suis dite que peut être ça représente les fragments issus justement de la coupure. mais quand l'enzyme coupe et on a une bande hétérozygote.. comment c'est possible.  [...]

[Biologie Moléculaire] TP digestion ADN par enzymes de restriction par électrophorèse sur gel d'agarose

Tu digères ton ADN de phage, tu te retrouves donc avec plusieurs morceaux d'ADN de différentes tailles que tu sépares sur un gel d'agarose pour voir leurs tailles (en comparant avec le marqueur de poids moléculaire qui sert d'étalon) et savoir combien de sites de restriction il y a dans ton ADN de phage.  [...] Piste 3. on voit deux bandes. ça correspond à combien de fragments du coup Donc à combien de coupures Donc à combien de sites de restriction EcoRI.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

Ok, cela n'aide pas vraiment, dis comme cela, mais lorsque je devais faire une carte de restriction, le plus dur est de la commencer. Une fois que tu as les deux premiers sites, cela devient généralement plus facile. Je te conseille donc de tracer un cercle, placer le site EcoRI, puis son copain, BamHI.  [...] On a la correction que je vous ait aussi mis seulement j'ai dû mal à la comprendre. Mon problème est surtout lorsqu'il faut mettre les sites de restriction.  [...]