• Forum - Site, Protéine, Intérêt

Ciblage de cellules de mamifères

Si certaines cellules aux caractéristiques particulières (surexpression de récepteurs,...) manquent d'une protéine X, est-il possible de faire rentrer cette protéine X dans des cellules de mammifères particulières in vivo (nanoparticule ).  [...] Dans le détail, la protéine d'intérêt est fusionnée à la protéine gag de HIV par l'intermédiaire d'un site protéolytique ce qui permet la libération de la protéine après fusion de la particule avec la cellule d'intérêt. En théorie, le choix des protéines d'enveloppe de la pseudoparticule permettent un adressage à différents types cellulaires.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur pET15b

Il me semble qu'il fait office de site de clivage permettant de retirer le HisTag de la protéine (on a pas la thrombine entière dans le plasmide. juste quelques nucléotides).  [...] Pour préciser, dans la protéine exprimée, entre l'étiquette et ta protéine d'intérêt se trouve un site de clivage par la thrombine, qui est une protéase.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification Protéines Tag 6His

J'ai donc l'impératif d'avoir une protéine native avec des sites disponibles pour interactions. Le tag GST est très gros et a une facheuse tendance à bloquer les interactions... damned.  [...] Il existe la serie de plasmides pGEX-4T qui possède un site de clivage par la thrombine. On peut ainsi libérer la protéine de la GST et n'éluer que la protéine d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] activité des protéines recombinantes

Je me demande si les protéines recombinantes fusionnées à la GST peuvent être active dans les cellules. D'autre part, est-ce qu'il est possible de couper la fusion GST de ces protéines.  [...] 2) Oui, il suffit d'insérer un site de clivage entre la GST et la protéine d'intérêt. Il existe des vecteurs contenant déjà ce site de clivage en amont du MCS, par exemple le Pgex6P1 pour l'expression en bactéries.  [...]

[Biochimie] Dégradation tag et protéase

Que voulez faire exactement Si c'est pour éliminer le tag, plusieurs options existent déjà telles qu'intercaller un site de coupure pour une enzyme spécifique entre le tag et la protéine d'intérêt.  [...] Le but de cette partie du projet, c'est d'avoir une activité protéase sur demande dans un organisme. Je pensais faire une protéine de fusion avec une partie de la protéase fusionnée au phytochrome, et l'autre partie fusionnée à PIF3, une protéine qui se fixe au phytochrome une fois activé par la lumière rouge.  [...]

[Biologie Moléculaire] La molécule mystère - Page 9

Bonjoru alors voila je propose une protéine qui a été identifiée par la méthode de screening par yeast two-hybrid. Il s'agit d'un membre atypique de sa superfamille car ne possedant pas de site de fixation a l'ADN mais un domaine putatif fixant un ligand. Cette protéine est exprimée plutot de facon ubiquiste mais présente un grand intérêt pour des avancées vous concernant vous les mecs.  [...] Dernier indice. L'attachement d'un microtubule à CENPE régule l'activité kinase de ma protéine et ainsi active/désactive le spindle checkpoint...je peux pas en dire plus.  [...]

[Biologie Moléculaire] purif des proteines recombinantes apres coupure au facteur X

Apres passage par la colonne Nickel pour récupérer la protéine recombinante (sachant que la chaperonne fait 50 Kd et ma proteine d'interet fait 25 Kd) comment dois-je procéder (après coupure au facteur X) pour récupérer le maximum de protéine et éliminer tous l'imidazole (l'imidazole est dangereux pour la suite de ma manip).  [...] la carte de mon plasmide est comme suit. une Chaperonne située en 5' (appelée Trigger factor. cela facilite le bon repliement de ma proteine d'interet et augmente d'une facon tres significative la solubilité de la proteine recombinante) suivi d'un His-tag puis du site de coupure du Facteur Xa et à la fin le Multiple cloning site.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

cette technique permet de fusionner la GST avec une protéine d'intérêt pour par exemple étudier les partenaires protéiques,  [...] c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...]

Les causes du cancer ? - Page 8

Il s'agit d'un site amateur mais j'ai pensé que peut-être certaines personnes de ce forum trouveraient un intérêt à les lire, notamment Vinc.  [...] Bref. La Science a bien changée depuis les années 70. L'évolution des connaissances et des performances techniques est ultra rapide et les gens sont désormais très spécialisés individuellement sur une protéine, par exemple. Monter un site sur ces écrits datant des années 60 en les présentant comme scientifiquement valables relève au mieux d'un intérêt pour l'histoire des sciences, au pire de la malhonnêteté.  [...]

[Biologie Cellulaire] Test d'activité des kinases

Pour un Western sur des phosphorylations, il faut posséder des anticorps spécifique de la phosphorylation que tu recherches dans ta protéine. Hors si c'est un site de phosphorylation encore inconnu, aucun anticorps ne sera disponible. En plus il peut y avoir des croisements de reconnaissance.  [...] Donc un essai kinase permet une évaluation plus directe d'une phosphorylation, à condition d'avoir une version Wt et une version mutante inphosphorylable sur le site que tu recherches et/ou que tu veux étudier. C'est assez simple comme expérience. Dans un même tube tu met ta protéine, de l'ATP froid et de l'ATP radiomarqué au 32P, et la kinase phosphorylant ton site d'intérêt.  [...]