• Forum - Signal, Séquence, ADN

clonage overlap... problème

Je dois réaliser un clonage overlap et je suis complètement perdu... En gros, je dois insérer le tag mcitrine entre le peptide signal et le reste de la séquence de ma protéine.  [...] Comment est-ce que je peux identifier la séquence d'ADN correspondant au peptide signal de ma protéine (je connais le peptide signal mais je ne sais pas comment identifier quelle partie de la séquence d'ADN correspond à ce peptide signal). Est-ce que je dois faire un blastx.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

En gros, la séquence d'ADN codant pour la protéine d'intérêt est fusionnée à une séquence signal (GST), puis des levures sont transfectées par le plasmide. Donc production de la protéine correctement modifiée et conformée (la protéine d'origine provient de la levure).  [...] Si tu as une protéine complètement inconnu, et pas son ADN, il faudra séquencer les acides aminés de la protéine un à un (en tout cas, le début de la protéine), avant de pouvoir trouver la séquence ADN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Facteur de Transcription ? (S.O.S)

Ah oui sachant qu'un promoteur et un terminateur ne sont pas transcrit je comprends mieux pourquoi un intron ne peut pas être un promoteur et il ne peut pas être non plus un facteur trans agissant en cis c'est à dire sur un promoteur car il ne code pour aucune protéine de plus lors de l'épissage du transcrit primaire il est éliminer donc du coup je comprends pas pourquoi on dit que l'intron n'est pas une séquence poubelle puis ce que finalement il ne participe pas a grand chose dans le gène Il me semblait qu'a une certaine époque on le considérait comme étant de l'adn poubelle et que finalement après le projet ENCODE de 2003 ça a révéler qu'ils avaient une importance dans la régulation mais qu'elle type de régulation.  [...] Non un gène est une séquence d'ADN comprise entre un signal de début et un signal de fin (ORF = Open Reading Frame) qui code pour un ARN. Certes dans la plupart des cas cet ARN est un ARN messager mais ce n'est pas obligatoire. par exemple les gènes qui codent pour les ARN du ribosome.  [...]

Pyroséquençage et PCR

J'ai une question concernant le pyroséquençage. Je ne comprends pas pourquoi on utilise la PCR lors du pyroséquençage. Je pensais que la séquence d'ADN qu'on voulait séquencer était simplement fragmentée en plusieurs séquences et que par la suite chaque séquence se liait à une bille de 28 micromètres et allait dans un puits où l'incorporation de chaque nucléotide émettait un signal lumineux qui permettant d'établir l'ordre de nucléotides. A quoi bon la PCR.  [...] Les nucléotides sont incorporés par la DNA-polymérase. Mais je vois toujours pas pourquoi une seule séquence ne suffirait pas.  [...]

Polymerase Chain Reaction

Ensuite a 60°C on hybride des amorces sur nos deux brins et a 72°C on introduit une enzyme -la taq polymerase- qui a partir des amorces va synthétiser les brins complémentaires. On se retrouve donc avec deux ADN bicaténaire donc 4 brins au total, on a doublé notre quantité d'ADN et on est prêt pour un nouveau cycle. Souvent on fait une petite trentaine de cycle.  [...] Non le FISH et la PCR sont deux techniques très différentes et n'ont pas les mêmes objectifs mais utilisent tout les deux une hybridation. La PCR a pour but d'amplifier la quantité d'ADN pour le quantifier par exemple. Le FISH consiste a hybrider une sonde fluorescente complémentaire d'une séquence particulière dans le but de détecter des anomalies chromosomiques, par exemple si tu ne détectes un signal fluorescent que sur un chromosome pour la séquence qui t'intéresse dans un organisme diploïde cela signifie que la séquence a subit une délétion sur l'autre chromosome. Cela permet donc de faire des diagnostiques.  [...]

[Biochimie] Synthese protéique

Ce sont les facteurs de croissance, liposolubles ou hydrosolubles, qui vont venir, soit traverser la membrane plasmique de la cellule par lipodiffusion, et trouver un récepteur cytosolique qui va lui ( facteur de transcription), entrer dans le noyau grâce à un NLS ( signal de reconnaissance) et venir transcrire la séquence spécifique d'ADN.  [...] Les ARN m ( messagers), sont alors indispensables, c'est la séquence ADN transcrite précedemment dans le noyau, elle contient l'information, tu commenceras toujours une synthèse de protéine par la methionine ( acide aminé), ce qui correspond à un codon AUG.  [...]

[Immunologie] origine de la diversité des anticorps

Concernant la diversité génétique de l'origine des Ac. un premier epissage se fait au niveau de l'ADN par l'intermédiare de séquence signal de reconnaissance et un 2me épissage se fait au niveau de l'ARN m afin de ne sélectionner uniquement les séquences variable et constante qui nous intéresse.  [...] Au niveau de ses réarangements ( ou recombinaison somatique ) la cellule T modifi son ADN ( fait unique à ma connaissance dans le vivant ). Des fragment d'ADN, les V D et J, vont s'associer. C'est déjà une source de variabilité. Ensuite la liaison entre les segments V D et J est très imprécise.  [...]

Séquençage de l'ADN

J'étudie actuellement les méthodes de séquençage et de détections de mutations dans l'ADN. Dans la méthode de séquençage par incorporation de didésoxyribonucléotides fluorescents (méthode avec la Taq polymérase), le signal qui signifie une hétérozygotie est lorsque deux nucléotides différents sont incorporés au même endroit (donc que la séquence s'arrête au même endroit mais avec deux didésoxyribonucléotides différents pour chacun des deux brins d'ADN dénaturés du départ) et ceci est synonyme de mutation.  [...] Je comprends bien qu'un mésappariemment est synonyme d'une mutation car il est anormal mais alors que signifie être hétérozygote pour un gène On peut très bien avoir dans notre génome, deux exemplaires différents d'un même gêne sans pour autant qu'il s'agisse de mésappariemments non Je ne comprends plus bien.  [...]

L'influence de l'environnement sur le phénotype : besoin de conseils de méthode !

- Si le milieu est uniquement constitué de glucose, alors la bactérie consomme cette substance et la transcription du gène lacZ correspondant à la protéine impliquées dans le métabolisme du lactose est très faible.   [...] Proposition de la question 2. Lorsque le milieu n'est pas composé de glucose, c'est le lactose qui est consommé par la bactérie. Un signal chimique active ensuite une protéine ( CAP ) du cytoplasme. Elle peut alors se lier à l'ADN au niveau d'une séquence particulière située avant le gène lac nécessaire à l'exploitation du lactose.  [...]

[Génétique] Protéines

Les phénomènes épigénétiques concernent des modifications héritables d'expression génétique sans modifier la séquence des gènes (les principales modifications épigénétiques concernent le code histone et la méthylation de l'ADN). Dans le cas présent, ce n'est que l'activation d'un gène par un signal cellulaire.  [...] Une définition toute simple du gène et qui rend bien compte de la réalité est qu'un gène est une séquence d'ADN qui permet la synthèse d'un ARN.  [...]