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Interactions Protéine-Protéine

Chaque protéine a un tag différent. L'interaction est physique si tu obtient un signal en révélant avec un anticorps dirigé contre la protéine 2 alors que tu as fait une immunoprécipitation préalable avec un anticorps dirigé contre la protéine 1.  [...] Peut être qu'une interaction physique signifie une interaction entre deux protéines qu'elle soit directe ou pas. C'est à dire que ce ne soit pas une interaction juste fonctionnelle par exemple une protéine qui active une autre protéine par le biais d'une voie de signalisation. A vérifier.  [...]

[Biologie Cellulaire] Southern Blot, Northern Blot et Western Blot

Ce gel est un peu compliqué à manipuler alors on fait migrer les protéines sur une feuille de nitrocellulose sans perde l'ordre des protéines. Pour finir on ajoute des anticorps qui vont reconnaitre spécifiquement les protéines que tu veux étudier. Ces anticorps sont couplés à une sonde lumineuse, chimique, radioactive.  [...] bref quelque chose qu'on peut mesurer. Plus le signal de l'anticorps est présent plus ta protéine était présente dans ton matériel de base.  [...]

[Biochimie] Purification de protéine pour ELISA

Mon principal problème (outre mes connaissances très limitées en biochimie) est que mon laboratoire dispose de relativement peu de moyens, et que je ne peux donc pas faire des anticorps adaptés à la carte. Je ne dispose que d'un seul anticorps (polyclonal) capable de se liguer à elle (A), et d'un seul anticorps conjugué (B, polyclonal aussi) qui reconnaît l'anticorps A.  [...] Mais comme l'anticorps A est utilisé 2 fois, j'ai peur que le conjugué ne se fixe aussi aux Ac A coatés à ma plaque mais sur lesquels ma protéine ne s'est pas fixée, et que du coup j'aie à peu près le même signal partout.  [...]

[Biologie Cellulaire] mise en évidence d'une phosphorylation

je travaille sur une protéine dont je voudrais mettre en évidence l'état phosphorylé. J'ai un faible marquage de cette protéine par un anticorps anti-phosphosérine/thréonine mais je voudrais m'assurer qu'il sagit bien d'un marquage spécifique. Pour celà, je regarde si ce signal disparait après traitement phosphatase (CIP ou lambda).  [...] Déjà, afin d'être sûre que la PKA ou la PKC phosphoryle la protéine in cellulo, vous pouvez transfecter des siRNA spécifiques de la PKA ou de la PKC et regarder si le marquage phosphosérine/phosphothréonine diminue voire n'apparait plus en western blot. La manip inverse peut aussi être une validation supplémentaire c'est à dire transfecter un plasmide surexprimant la PKA ou la PKC et regarder en western blot si le marquage par l'anticorps anti-phosphosérine/thréonine augmente.  [...]

[Biochimie] Extraction d'une protéine nucléaire pour WB

Le probleme c'est que ma protéine est pas très exprimé et les anticorps ne sont pas de très bonne qualité (et les tampons d'extraction pas forcement les meilleurs), au final j'ai beaucoup de non spécifique, pas beaucoup de signal au niveau de ma bande.  [...] un conseil pour les grosses protéines comme la tienne, il est recommandé de faire un transfert sur la nuit (ca transfert tres mal).  [...]

[Biologie Cellulaire] Problème immunofluo

quelqu'un aurait de l'expérience en IF voici mon problème. j'ai jusqu'à présent travaillé avec des cellules vivantes en fusion GFP. Désormais je dois faire des IF sur cellules fixées. Pas de problèmes pour un marquage de la tubuline (avec des anticorps) ou pour un marquage actine (avec de la phalloidine), mais pas moyen d'avoir un signal avec ma protéine d'intérêt.  [...] L'anticorps marche bien en WB et la personne ayant précédemment travaillé dessus avait un signal qui semblait cracher à fond. J'ai suivi son protocole à la lettre mais pas moyen Pourrais-il y avoir un problème avec l'anticorps secondaire.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorps WB ou ICC

En effet, j'ai un anticorps primaire (cadeau d'un autre labo) qui fonctionne en ICC mais quand j'ai voulu faire un WB, je n'avais aucun signal spécifique... Après un petit coup de bibliographie, ils'est avéré que cet Ac n'avait jamais été utilisé lors des WB, et même dans une publi où il était utilisé pour de l'ICC, l'équipe avait utilisé un Ac commercial dirigé contre les mêmes aa de la protéine cible pour faire le WB.  [...] Dernière chose, les résultats sont très différents selon qu'on produit des anticorps dirigés contre une protéine totale ( a l'ancienne ) ou contre un fragment synthétisé.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dot blot

Je dis que ce n'est pas aussi rigoureux qu'un western parce que les protéines ne sont pas solidement ancrées dans la membrane et si un jour tu as l'occasion de faire un western et un dot-blot en parallèle hybridés avec le même anticorps tu pourrais avoir des surprises comme cela m'est arrivé.  [...] Mais il se trouve quand dans mon cas le signal était spécifique (contrôle avec un mutant nul). Un anticorps peut fonctionner en dot et pas en WB. Ce qu'il y a avec le dot c'est que vous n'avez pas d'information fine. Vous pouvez dire que la protéine est là et parfois quantifier.  [...]

[Biologie Cellulaire] synthèse de protéine

Oui vous avez bien répondu à ma question merci. Mais il y a autre chose que je n'ai pas compris. Mon prof a parlé d'une protéine signal peptidase qui est localisé sur la phase luminale du réticulum endoplasmique rugueux. Et je ne suis pas sûre d'avoir compris son rôle et comment elle fonctionne.  [...] Je pense avoir compris que cette protéine signal peptidase va séparer la séquence signal peptidase afin de l'éliminer car son rôle ne serait que de faire entrer la protéine dans le réticulum.  [...]

[Biologie Cellulaire] Protéine actives et code postal (signal).

. Un peptide signal, s'il est présent, sert à envoyer une protéine à sa destination. Ces peptides là sont en N-Term ou C-Term.  [...] . Pour l'insuline, tu n'es sans doute pas sans savoir qu'elle est donc d'abord sous forme de pro-insuline. Le peptide C en question dont tu parles sert à lier la chaine A et B de l'insuline. Donc en forme inactive ==. Pro-insuline avec une seule chaine (c'est en fait.   [...]