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[Génétique] comment obtenir des sondes spécifiques pour un marquage chromosomique avec les séquences alu?

Si j'ai bien saisie les bases. les séquences alu sont des marqueurs de répétition du génome utilisés dans ce cas. Ce qui permet l'identification lors d'un marquage basé sur les sites alu c'est leur nombre de répétition et leur répartition sur les télomères qui diffèrent d'un chromosome à l'autre.  [...] Je vois bien comment avec un simple marquage de ces séquences on peu obtenir un résultat dont l'analyse serait proche de celle d'un marquage bande sombres/bandes clairs. En revanche je ne comprend pas comment en se basant sur l'hybridation de ces séquences universelles on puisse arriver a un marquage spécifique in situ du chromosome 8 en vert,du 7 en bleu.  [...]

[Evolution] Variations sur un thème de synthétase...

1) Dans le but d'étudier la répartition de ces 2 mécanismes, une étude est menée par a) analyse de séquence pour les bactéries dont le génome a été séquencé, et b) par PCR dans les autres cas.  [...] Je pense que l'analyse des séquences de chaque gène au sein de l'ensemble des bactéries au génome séquencée permet de repérer les régions les plus conservées, ce qui permet de dessiner les oligos sur ces régions. Ainsi, il est possible de rechercher tel ou tel gène par PCR dans les organismes étudiés en étant relativement confiant lorsque l'on a un résultat positif en PCR (une bande à la bonne taille).  [...]

Casse tête de PCR

J'ai réalisé un alignement entre la séquence du plasmide et les amorces (PromoterWise) il n'y a rien qui expliquerai des hybridations non spécifiques et encore moins c'est taille la d'amplicons.  [...] Voila ou j'en suis je précise que j'ai linéarisé mon plasmide sur gel et purifié la bande pour tenter de résoudre le problème sans résultat. J'ai aussi essayé une première fois avec des amorces simples (sans bras d'homologie 29pb) j'ai eu ces bandes non spécifiques mais également mon plasmide amplifié alors que l'emploi de Méga amorces (amorces simples + 50pb homologues a la séquence a insérer) n'a donné que de l'amplification non spécifique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème génotypage souris mutées

J'ai bien pensé au problème de la lignée mais j'ai re-analyser des échantillons pour lesquels j'avais un bon résultat il y a quelques mois et je n'ai obtenu qu'une bande alors que je devrais en avoir 2 pour certains, et j'ai utilisé l'ADN issu de la même extraction donc je ne pense pas que ce soit ça.  [...] Après de nombreux essais sans succès j'ai récupéré la 2ème bande avec 4mM de Mg2+ et 0.5µM d'amorces (avant j'étais à 1.5mM Mg2+ et 0.2µM d'amorces) mais elle est très faible et j'ai aussi amplifié des produits non spécifiques. Donc je suis restée dans ces conditions pour analyser d'autres échantillons mais je n'ai encore obtenu qu'une seule bande, donc retour à la case départ.  [...]

[Microbiologie] Profil PFGE

j'ai une petite question.Lors des analyse d'un profil PFGE,j'arrive pas à comprendre comment on peut distingué entre une bande qui correspond à un plasmide ou à un fragment d'un chromosome,ou à un mini chromosome,ou à un ARN.. c'est selon la taille de la bande.  [...]

[Biologie Moléculaire] purif des proteines recombinantes apres coupure au facteur X

Non pas de meilleure idée. Un centricon YM20 me semble bien pour éliminer l'imidazole. Si vous voulez bien tout éliminer il suffira de compéter en buffer quelques fois avant de récupérer votre fraction (sans assecher la colonne bien entendu). J'imagine que l'on peut aussi faire ça en dialyse mais je ne l'ai jamais fais en pratique, je ne vous le conseillerai donc pas.   [...] mais j'ai eu un probleme au niveau de la conservation des clones utilisés (cryoconservation dans le glycerole à -80°C), quand je relance une culture (peu de temps apres) à partire du glyerole (le glycerole est fait à partire de la préculture dans laquelle je n'ai pas encore mis l'IPTG), là c'est surprise mes bacteries poussent (dans un milieu LB Ampicilline) mais ils produisent moins la proteine (on dirai qu'elles perdent l'induction par l'IPTG) est ce qu'il y a quelqu'un qui a deja eu ce genre de probleme.   [...]

[Biologie Cellulaire] TS :photosynthése et expérience

2)après 20min dans l'enceinte, la feuille est placée à l'obscurité au contact d'une pellicule photo vierge.l'ensemble est conservé au congélateur. les réactions chimiques dans les tissus foliaires sont donc bloquées, mais la radioactivité du 14C n'est pas affectée.   [...] Maintenant il faut que tu fasses le lien entre les cours de bases sur la photosynthèse qui sont prodigués en terminale S ( si je réponds, c'est que j'y ai été ) et le fait que tu aies un morceau de feuille qui est placé dans une enceinte lumineuse avec CO2 marqué à la lumière, et un autre morceau à l'obscurité ( caché par un cache ).   [...]

miniprep ADN et RNase

Pourquoi tu ne mets pas de RNase pour cela semble important, et je pense que ca pe jouer sur ta digestion enzymatique, moi je fé toujours mes miniprep avec de la RNase et ca marche toujours bien.   [...] Le résultat après digestion est que pour un plasmide j'obtiens un profil à 7000 et 3000pb alors que la deuxième bande devrait etre à 1000. Et pour le deuxième plasmide j'ai seulement une bande à 3000pb alors que je devrai avoir une seconde vers les 5000.  [...]

Confirmation de l'insertion d'un gène dans un plasmide

Comme sur un gel d'électrophorèse par exemple. J'ai pensé à ca mais je ne suis pas très sûre du résultat, je devrai visualiser juste une seule bande, sachant que la taille de mon gène est de ~880pb et le plasmide que j'utilise est de ~7900pb donc en principe j'aurai une bande de ~8700pb. Est¬ce une méthode correcte.  [...] Oui c'est toujours comme cela que l'on fait d'ailleurs. On établit la carte de restriction du plasmide en utilisant des enzymes de restriction. A minima, une enzyme de restriction qui ne coupe qu'une fois permettra de linéariser le vecteur et d'en trouver la taille en faisant migrer le produit de digestion dans un gel d'agarose.   [...]

[Biologie Moléculaire] Miniprep qui ne marche pas

Apres avoir réalisé un clonage de 20 plasmide puis des transformations bactérienne, et culture bacterienne j'essaye depuis quelques jours d'extraire mes plasmides.   [...] J'utilise un kit mini prep de la marque QIAGEN (datant de 2011 et dont les solutions sont qasi vide), lors de l'analyse sur gel d'agarose, je n'obtient aucune bande de migration.  [...]