• Forum - Séquences, Restrictions, Extrémités

[Biotechnologie] Que veut dire ... ?

en rajoutant certains nucléotides a tes amorces (qui representerons les extrémités de tout ce que tu auras amplifié) tu auras donc ajouté des petites séquences de part et d'autre de ton gène,  [...] grace a ces séquences de restriction, et sous l'actions d'enzymes de restrictions ou de ligases, tu pourras intégrer la sequence que tu as amplifié, à l'interieur d'un vecteur, ou au contraire l'en extraire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage - Page 2

donc l'objectif etait de faire une amorce sens a gauche en inserant un site de restriction une amorce qui est vers le MCS mais là elle permet d'apporter 2 sites de restrictions et de l'autre coté faire une amorce sens a droite en inserant un site unique (les deux inserts ont donc a leurs extremités un site unie et au milieu au refait un MCS) et de meme son amorce complémentaire est vers le MCS et permet d'inserer 2 nouveaux sites de restrictions.  [...] je suis bien d'accord, mais ces sites vont etre au niveau des morceaux de genes aux extremités que je ne veux pas donc certes apres restrictions ils seront amputés et donc pas fonctionnel mais il y aura toujours des morceaux donc c'est pas très propre, les deux sites uniques que j'ai mis juste pour cadrer la sequences que je veux ont ce role, d'eviter d'avoir les parties aux exterieurs.  [...]

[évolution] Théorie de l'évolution?? vrai ou faux... - Page 6

Les séquences d'acides aminés possibles sont d'un nombre infiniment vaste (comme celui des séquences de lettres pour former des mots, des phrases, etc). Les séquences obéissant à des restrictions particulières qui peuvent être définies, à l'instar des règles de grammaire, sont donc nécessairement d'une très grande rareté.  [...] Si les molécules initiatrices de la vie ont bien été réunies dans une soupe primordiale, les acides aminés de l'espace ont pu fournir les quantités critiques pour permettre ces réactions. De même, si les événements prébiotiques ont eu lieu dans les fonds marins, ils ont pu bénéficier de composés extra-terrestres qui tombaient en pluie dans les océans.   [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

Les sites de restrictions sont en fait des séquences consensus dites palindromiques qui sont donc identiques dans le sens 3'-5' et 5'-3'. Ces séquences soont reconnues par des enzymes particulières très souvent d'origine bactériennes (EcoR1, EcoR5, BamH1...).  [...] Elles permettent notamment en génie des vecteurs, d'ouvrir un plasmide, et d'y insérer un gène YFG dont les extrémités sont construites pour etre complémentaires avec le site de restriction pour que cela colle pile poil.  [...]

[biologie moleculaire] Cartographie du genome

dans la catographie physique du genome humain je ne comprend pas comment les clones s ordonnent le long du chromosome et comment peut on grace a cela connaitre la sequence exacte est ce qu on doit faire un sequencage avant c pas clair dutout merci pour votre aide.  [...] Pour realiser une cartographie physique on sequence les différents clones, ces clones possèdent des fragments du chromosome a cartographier et ses fragments sont chevauchant (car digestion partielle par des enzymes de restrictions) donc les sequences des différents fragment sont ensuite alignées par ordinateur grace aux sequences chevauchante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Améliorer la spécificité d'amorces

Avez-vous essayé, puisqu'il semblerait que vous travailliez en séquences connues, d'utiliser des profils de restrictions ou en analyse de fragment.  [...] Je ne comprends pas bien ce que vous voulez faire. Cependant j'ai une question. Est ce que vous connaissez les séquences de vos allèles Parce que dans ce cas vous pouvez déterminer vos amorces pour qu'elles se terminent en 3' sur une partie variable. Pas d'hybridation pas d'amorcage.  [...]

[Biologie Moléculaire] Primers

les primers sont utilisés dans la majeure partie des techniques in-vitro nécessitant des polymérases, en particulier pour toutes les techniques de PCR. Comme tu le sais surement, pour dupliquer l'ADN (ou l'ARN dans certains cas), la polymérase à besoin d'une amorce, une petite séquence de nucléotides fixée au brin a répliquer, sur laquelle la polymérase va pouvoir prendre appui, ce sera le role des primers.  [...] Les primers peuvent aussi être crées de manières à ajouter des séquences de restrictions de chaque coté de la séquence amplifiée, lui permettant de l'introduire par après dans un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Lorsqu'une enzyme de restriction a efficacement digéré un ADN, cet ADN est coupé en un ou plusieurs sites. Comment vérifier qu'un ADN est coupé Cette technique fonctionne-t-elle quelque soit mon type d'ADN (génomique, plasmidique, produit de PCR, etc.).  [...] Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).  [...]

Sequences répétées

Les séquences palindromiques existent chez les procaryotes et eucaryotes, je ne peux pas trop t'avancer sur leurs rôles, je pense que c'est des séquences qui sont reconnues par des enzymes de réstrictions par contre pour moi SSR ce sont des produits synthétisés qui ont pour nom les initiales d'un labo, donc peux tu developper ta question s'il te plait.  [...] des SSRs sont des Simple Sequence Repeats, ou microsatellites, elles sont utilisées comme marqueurs génétiques d'identification d'individus, dans l'étude du polymorphisme.  [...]

[Biotechnologie] An efficient TALEN mutagenesis system in rice

Je suppose que les séquences ciblées par les enzymes de restrictions participent du transgènes, auquel cas on digère la séquence ADN et on regarde ce que ça donne par PCR pour détecter les inserts.  [...] and by sequencing. The mutant sequences we have identified contain contain small deletions and insertions. Most mutations are small deletions ranging from 1 to 20 bp, and they often occur in the spacer region between the TALEN binding sites [34]. With this protocol, the PCR/RE assay cannot be applied to a target locus if no restriction site is found in the spacer region.  [...]