• Forum - Séquences, ADN, Bandes, Enzymes

[Biologie Moléculaire] Séquences du TYLCV

svp est ce qu'il y a quelqu'un qui pourra m'aider à trouver les séquences d'ADN du TYLCV et les tailles des bandes résultantes d'une RFLP effectuée sur l'ADN du TYLCV par les enzymes sma1 et dra1.  [...]

[Microbiologie] Problème pour l'analyse d'un article

Alors j'ai regardé vite fait et je pense qu'il s'agit d'un séquençage par extension d'amorces. Les lettres à gauche sont les 4 oligonucléotides A, T G et C composant la séquence d'ADN et les bandes en dessous indiquent quand il y a un A, un T, un C ou un G dans la séquence. Elle se lit en partant de ton amorce.  [...] On réalise la même expérience sur l'ADNg (même amorce mais avec Taq DNA polymérase) sauf que là on fait un séquençage. Au niveau du point +1, on aura donc un fragment faisant la même taille que le fragment généré par l'expérience de RT. En accolant les gels où on a fait migrer les produits des deux expériences (RT et séquençage), on peut donc voir les bandes qui s'alignent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Amplification PCR

J'ai donc tester ces oligos sur l'ADNg de ces espèces séquencés et ce couple fonctionne très bien, je n'ai pas de bandes parasites. Néanmoins, j'ai également une amplifications sur mon témoin négatifs. Il ne s'agit pas du blanc sans ADNg hein, non il s'agit de l'ADNg d'une autre souche séquencée qui n'est pas supposer contenir ce gène dans son génome.  [...] Au contraire, le séquençage te donne une information précise sur ce qui s'est déroulé pendant ta PCR. Tu pourras connaitre le pourcentage d'homologie entre l'amplicon du témoin négatif et ton gène d'intérêt ou du moins savoir à quelles séquences s'hybrident tes amorces, facilitant ainsi le design d'amorces plus spécifiques.  [...]

[Génétique] SMEAR qui es tu??

j'aimerai bien que qqun me repond car je suis vraiment en galere.Au pire me donne une reference des titres de bouquin dans lequel je porrai potasser.   [...] En biologie moléculaire, le terme smear désigne la multitude de bandes observées sur gel d'agarose lorsque par exemple ton ARN est très dégradé, un ADN génomique a été digéré par une enzyme à forte fréquence de coupure, que ta PCR est vraiment très foireuse, etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme PCR ,la technique inverse-shifting PCR ,génotypage de l’inversion 22 hémophilie A

Cette technique comporte 3 etapes ( digestion enzymatique de l adn, ligation et PCR multiplex ), nous avons un profile attendu qu'on doit retrouver chez un patient qui porte l'inversion 22 qui est la présence de 2 bandes avec des tailles bien précises mais malheureusement on n'arrive pas à.  [...] Donc s'il y a un d'entre vous qui a déjà essayé cette technique de inverse shifting PCR et qui a rencontré des obstacles ça serait très sympa de partager ses hypothèses et ses astuces avec moi. Merci d'avance.   [...]

[Génétique] Retard sur gel

de méme pour le 2 éme complexe, si la bande à un poids moléculaires plus élevé, est ce que c'est car le complexe protéique B est plus lourd ou bien que sur cette bande il ya aussi le complexe protéique A attaché.  [...] avoir trois bandes en plus de la sonde libre dans une expérience de gel retard conduit à deux hypothèses.  [...]

Sequence 5' pour un ADNc en Southern Blot

Lors de l'etude de la plus frequente maladie hereditaire, l'hemochromatose, on remarque que la pathologie est du au gene HFE. On effectue alors un southern Blot sur l'ADNc et l'ADN genomique, expression du gene. Ils sont digeres par l'enzyme de restriction Hind III. Voila les resultats que l'on obtient.  [...] Voici ma question. Compte tenu du fait que l'ADNc ne contient que des exons comment se fait il que la sonde extremité 5' detecte quelque chose car il me semble que dans L'ARN mature ( qui permet d'obtenir l'adn c par RTPCR ), la sequence 5' n'est pas transcrite.  [...]

[Biochimie] contrôle interne pcr

Dans la colonne du contrôle positif, j'ai deux bandes. celle du contrôle interne (157 bp) et celle du contrôle positif(284 bp ). C'est là que je comprends pas bien, est ce que le gène (inv A) des salmonnelles a la même taille que la séquence de l'adn du contrôle positif reconnue par les primers.  [...] Théoriquement, oui. On en revient à un problème de stats, les amorces puis la Taq auront plus de chance de s'hybrider puis d'amplifer votre témoin interne que votre séquence d'intérêt. Et suivant le principe de la PCR, cela ne va pas en s'arrangeant Mais l'inverse est aussi vrai.  [...]

RT-PCR et PAGE en conditions dénaturantes???

C'est sutout vrai pour la migration d'ADN circulaire, type ADN bactérien, mitochondrial ou encore plasmide. On obtient souvent 2 bandes correspondants à une forme enroulées qui va se faufiller dans le gel, et une bande de plus haut PM apparent. Je ne me rapelle pas avoir utiliser de l'urée pour un northern ou un southern blot.  [...] on travaille en conditions dénaturantes pour éviter que les structures secondaires (ADn ou prot)n'interfèrent dans la migration ou qu'on ait deux bandes au lieu d'une.  [...]

Carte de restriction d'un plasmide

bonjour tout le monde. s'il vous plait je vous savoir comment on peut déterminer la taille d'un vecteur et celle d'ADN génomique dans un plasmide recombinant, j'ai trop cherché sur l'internet mais j'ai pas trouvé la réponse précise. merci d'avance.  [...] Question confuse. Dans un plasmide recombinant on a un vecteur et un insert. L'ADN génomique humain a une taille d'environ 3 000 000 000 Nt. Mais je suppose que c'est la taille de l'insert du plasmique recombinant que tu veux.  [...]