• Forum - Séquence, Réplication, Vecteur

transgenese

Le vecteur est une molécule d'ADN auto-réplicable dans laquelle on insère, on clone, un fragment d'ADN provenant d'une autre source (bactérie, virus, eucaryotes,……etc.).  [...] C'est pourquoi les chercheurs ont eu l'idée de les utiliser pour transférer les gènes thérapeutiques dans les cellules des patients. Donc les vecteurs viraux sont des virus recombinants qui ont gardé leur capacité naturelle à entrer dans la cellule hôte mais perdu celle de se répliquer dans cette cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] pcr/clonage

Est ce qu'on fait la PCR apres avoir inseré les fragments d'intérets dans les vecteurs,ou est ce qu'on amplifie par PCR les fragments d'intérets qu'on insere ensuite dans le vecteurPour moi la PCR est une technique de clonage,donc si on connait la séquence qu'on veut cloner,une PCR est suffisante,il n'y a pas besoin d'utiliser de vecteurs apres.  [...] Il faut donc un promoteur en amont du fragment pour qu'il soit transcrit, il faut des séquences d'initiation de la transcription pour l'expression chez une bactérie, une séquence ori qui permet la réplication du vecteur et de son insert. Tout ceci se trouve dans un vecteur et est indispensable à l'utilisation du fragment isolé.  [...]

[Biotechnologie] vecteur de clonage et vecteur d'expression

CA peut être plus ou moins similaire, a part que le vecteur de clonage est fait pour être réplicable en bactéries (comme une sorte de vecteur navette ou on insère ce que l'on veut pour l'amplifier, c'est a dire qu'il contient des origines de réplication, des sites de clonages, etc), tandis que le vecteur d'expression est lui équipé des éléments nécessaires a l'expression de ta séquence, que ce soit expression procaryote ou eucaryote.  [...] Un vecteur de clonage permet, comme son nom l'indique, de faire un clonage, c'est à dire de placer un insert dans le vecteur d'intérêt (ligation) puis après transfection/conjugaison/infection/... de multiplier la quantité d'ADN au cours des divisions bactériennes/des infections virales/... selon le type de vecteur utilisé.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

Par exemple, tu veux faire un cloner une séquence que tu vas amplifier par PCR avec des sites de restrictions dans les primers pour l'insérer dans le vecteur cible.  [...] Dans cette fenêtre de construction, il faut ouvrir la séquence du vecteur, choisir les sites de début (simple clic) et de fin (double clic). Faire de même avec l'insert. Blunter si nécessaire et cliquer sur Ligate. Notez que si l'insert est, par exemple, EcoRI (début)/BamHI (fin) alors le vecteur doit être ouvert par BamHI (début) / EcoRI (fin).  [...]

vecteur d'expression

Le vecteur d'expression comprend la partie codant de ton gène, ainsi que des séquence non codante. promoteur, origine de réplication, polylinker... et souvent des gènes de résistances (ampiciline, neomycine...) ou des tag.  [...] Le vecteur d'expression est en général un plasmide circulaire contenant le gène d'intérêt accompagné de tous les éléments nécessaires à sa transcription, une ou plusieurs origines de réplication et un marqueur de sélection (gène de résistance ou autre).  [...]

[Biologie Moléculaire] Séquences répétées inversées

Pas exactement. Une séquence répétée inversée est contenue dans un vecteur par exemple afin d'inactiver un gène d'un génome. Cette séquence est constitué du gène en question (5'-3') et de la séquence de ce gène mais inversées (3'-5').  [...] Si on veux invalider un gène ATTCC par exemple contenu dans un gènome, on transforme le microorganisme par un vecteur contenant la séquence ATTCCCCTTA (soit la séquence du gène à invalider et la séquence du gène mais inverser).  [...]

[Biologie Moléculaire] Quelques questions ??

3-si par exemple on coupe un plasmide par Bamh1 et on insere une sequence d'adn. Comment peut on verifier la presence de ce fragment ajoute dans le plasmide.  [...] Le vecteur d'expression contient en plus de la séquence de résistance et du site de multi-clonage et du site d'origine, il contient en plus un promoteur.  [...]

Que ce qu une ligné d encapsidation?

L'approche expérimentale, retenue par la communauté scientifique en TG, consiste en l'utilisation d'un vecteur rétroviral défectif pour la réplication virale qui sera complémenté en trans pour les fonctions GAG, POL, ENV (virus helper) par une lignée cellulaire d'encapsidation.  [...] Le vecteur proprement dit conserve les séquences cis régulatrices indispensables. les LTR pour le contrôle de la transcription et de l'intégration, y pour l'encapsidation et PBS (Primer-Binding Site) pour la réplication virale.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour choisir un vecteur, il te faut regarder la force de l'origine de réplication (qui détermine le nombre de copies de plasmide dans la bactérie), les résistances aux antibiotiques (sélection des bactéries intégrant le plasmide), la présence d'autres marqueurs de sélection comme la beta-galactosidase, le type de système d'expression (promoteur euca/procaryote, RBS pour traduction chez procaryote,  [...] Pour ce qui est finalement du choix du vecteur, il te faut un vecteur contenant une origine de réplication procaryote, un gène de résistance à un antibiotique et pourquoi pas le gène beta-galactosidase à cheval du polylinker (cela permet de sélectionner les bactéries qui ont un plasmide ayant intégré un insert), et bien sûr le polylinker.  [...]

Créer une protéine taguée NLS

J'ai ma séquence codant ma protéine dans un vecteur A. je suis capable de la sortir.  [...] Quelqu'un connait-il un vecteur avec un tag NLS dans lequel je pourrai rentrer la séquence codant ma protéine Puis-je acheter directement le TAG.  [...]