• Forum - Séquence, Promoteur, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Séquence du promoteur du gène résistance à l'ampicilline

Ton gène est sous la dépendance de quel promoteur Son propre promoteur (P bla ) Si tu regardes la séquence de ton plasmide, tu risques d'y troruver quelques infos utiles.  [...] Vous avez la séquence du plasmide. J'imagine que sur la carte vous devez avoir les limites de votre cassette ampi (promoteur et séquence codante). Y a qu'a compter pour trouver la séquence de votre promoteur sur votre plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Programme de clonage

Je vous donne un exemple. en voulant cartographier le plasmide pEGFP-N1 de Clontech ( http.//www.clontech.com/images/pt/di...s/PT3027-5.pdf ), j'ai remarqué qu'après un Scan, le promoteur CMV n'apparaît pas. En effet, la séquence consensuelle diffère de celle de la librairie d'un seul nucléotide (en position 509 de votre séquence, il y a un C, alors que c'est un G dans la séquence consensuelle).  [...] Ayant quelques centaines de plasmides à répertorier, procéder à des alignements de séquence pour chacun d'entre eux me prendrait beaucoup de temps.  [...]

levure s. POMBE

À mon avis mon ami/e zara, si j'étais à ta place, je commencerait par trouver la séquence génétique de la protéine en question (l'hormone) puis je vais chercher à mes séquences possibles après utiliser la fameux code génétique de 3 bases. Puis en utilisant les bancs de génomes de diffèrent espaces je pourrai belle & bien trouver la matrice génomique en ADN.  [...] Après tout ça je dois essayer insérer la bonne séquence dans un plasmide (Vecteur) et n'oublie pas la procéder par une bonne promoteur. Puis les méthodes de transfection nous aideront à introduire le gène dans la cellule méchante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Ribosonde

- La séquence d'intérêt clonée dans un vecteur (plasmide, ADN donc) contenant un promoteur viral (T7, T3 et SP6 sont les plus utilisés).  [...] - Mélanger les ingrédients afin d'obtenir une réaction de transcription de la séquence d'intérêt à partir du promoteur viral. Lors de la transcription, l'UTP radioactif sera utilisé et l'uracile marquée sera ainsi incorporée à l'ARN.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Lorsqu'on incorpore un gène dans un plasmide disponible dans le commerce, on aimerait insérer le moins d'ADN supplémentaire possible en plus du gène réel avec son promoteur. Parfois, cependant, il n'y a pas de séquence de restriction appropriée dans la région avant et après le gène qui peut également être trouvé dans le plasmide.  [...] Une fois ta PCR faite, tu digères tes fragments avec les 2 enzymes et pareils avec ton plasmide. Quand tu choisis tes sites il faut que tu vérifies l'ordre dans lequel les sites de restriction sont présents sur le plasmide. Dans notre cas, il faut que EcoR1 soit avant HindIII et le tout après le promoteur déjà présent sur le plasmide (sinon ton insertion se fera à l envers). Donc il faut que ton plasmide ait.  [...]

[Biologie Cellulaire] Vecteur d'expression transitoire

Oui il y a expression de ton plasmide sans séquence Ori car cette séquence est nécessaire pour la réplication du plasmide et c'est une origine de réplication procaryote lorsqu'on fait des expressions transitoires car on produit les plasmides chez E. coli. Pour initier la transcription on utilise la plupart du temps le promoteur fort du cytomégalovirus (CMV) que l'on place en amont de la séquence codante.  [...] Dans le cas du promoteur fort CMV, je ne pense pas que ce soit des facteurs de transcription spécifique qui se fixe à sa séquence mais tout simplement les facteurs généraux de transcription. C'est juste que la force du promoteur est bonne. le complexe de transcription est rapidement associé au promoteur et positionné, et l'étape d'initiation se fait elle aussi rapidement, ce qui permet à la RNA polymérase II de rapidement libérer le promoteur pour qu'une autre RNA polymérase II vienne se positionner à son tour.  [...]

[Biologie Moléculaire] Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

J'ai un plasmide gateway (sans promoteur) de chez Invitrogen et je suis déjà en train de faire sortir la séquence pour la mettre dans un pDEST, mais nous avons quelques problèmes.  [...] La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé.  [...]

Insertion d'un promoteur sur un vecteur plasmidique

A désolé j'avais pas vu que tu demandait aussi comment l'isoler. Bein les séquences de ce types de promoteur sont archi connues donc quand tu commandes tes amorces, tu peux leur demander qu'ils te rajoutent ta séquence promotrice en amont de ton amorce 5' et le tour est joué.  [...] Je t'explique simplement comment on procéderait en recherche, et si dire tu prends la séquence du promoteur et tu la colles dans le plasmide te demande de la réflexion à un point tel que ça en devient intéressant pour toi, alors je ne sais plus quoi dire.  [...]

[Biologie Moléculaire] promoteur sequence regulatrice et activité CAT

mon exo consiste en la transfection de cellules utérines par un plasmide contenant un gène CAT,un promoteur eucaryote et des séquences cis régulatrices en amont du promoteur.  [...] C'est l'effet de l'E2 ou de la progesterone sur l'expression du promoteur qui est étudié. L'interaction de E2 ou de la progesterone sur les séquences régulatrices cis peut entrainer une modification de l'expression du promoteur et donc de l'activité CAT (comme dans le cas de l'estradiol).  [...]

[Biochimie] étude de promoteur

Faire une analyse bioinformatique de ton promoteur (sequence) pour voir s'il y des séquences spécifiques à certains facteurs (tu sauras déjà mieux dans quelle direction aller...).  [...] Une manip' envisageable est de faire un test rapporteur dans une lignée cellulaire. Vous clonez votre promoteur ou des morceaux de votre promoteur en amont de la séquence codante d'un gène rapporteur (CAT, Luc). Vous cotransfectez avec un plasmide codant pour votre facteur de transcription.  [...]