• Forum - Séquence, Enzymes, Restriction

[Biologie Moléculaire] polymorphisme de restriction

C'est une séquence de l'ADN qui peut être reconnue par une enzyme de restriction. Les enzymes de restriction sont des protéines capables de reconnaître ces sites et de couper l'ADN à ce niveau. Les sites de restriction ont la particularité d'être des site palyndromiques, c'est-à-dire qu'ils sont les mêmes dans un sens ou dans l'autre.  [...] En lisant cet article, vous comprendrez d'une petite modification de la séquence d'ADN peut faire apparaître ou disparaître un de ces sites de restriction, et que ce phénomène peut être exploité pour détecter ces polymorphismes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction VS fragment d'ADN

Combien de paires de bases nécessite une enzyme de restriction de part et d'autre de son site de reconnaissance afin qu'elle puisse opérer la coupure du fragment dans les meilleures conditions.  [...] Bonjour, j'aurais une question de novice sur les enzymes de restriction. En quoi le fait d'être un site palindromique du style ATAT rend une séquence vulnérable aux enzymes de restriction.  [...]

[Génétique] adn et police scientifique TPE help svp !

3) Donc je pense peut-être qu'on coupe cette séquence de PCR (qui me parait pourtant déjà bien réduite) avec des enzymes de restriction pour ensuite pouvoir procéder à l'electrophorèse. Mais je sais qu'en criminalistique, on ne se sert que des introns (séquence non codante), (pour raisons éthiques) or je croyais que les enzymes de restriction étaient spécifiques aux gênes (or gêne absent sur les séquences non codantes) donc là aussi je bloque.  [...] 3) les enzymes de restriction ne sont pas spécifiques aux gènes mais à des séquences, si la séquence se trouve dans un intron, elle va couper quand même.  [...]

vecteurs

un vecteur de clonage a pour fonction d'amplifier un bout d'ADN (codant pour un gene la plupart du temps), ca correspond typiquement a un plasmide qui possede les sequences necessaires de selection et de replication.  [...] Bonjour moi je souhaiterais savoir la methode pour placer le gene de la luciferase sous le controle d'un promoteur precis.Comment faire pour obtenir la sequence que l'on souhaite Merci beaucoup.  [...]

[Biochimie] Enzyme de restriction

Je voulais avoir une petite précision sur les enzymes de restriction. Dans mon exercice j'ai un tableau avec différentes enzymes de restriction et les séquences clivées correspondant a chaque enzyme. Cela veut dire que si j'ai par exemple pour une enzyme X, la sequence clivee.  [...] Tout dépend de ton enzyme de restriction. Il en existe de toutes sortes, celles qui reconnaissent une séquence et qui coupe 100 nucléotides plus loin, celles qui vont couper à l'intérieur de la séquence de reconnaissance, celles qui vont avoir besoin de 2 séquences de reconnaissances mais n'en couper qu'une, ou même encore ailleurs, etc.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Supposons que l'on veuille insérer un brin d'ADN de séquence inconnue dans un vecteur, comment fait-on pour choisir les enzymes de restriction idoines pour couper ce brin d'ADN au bon endroit (c'est à dire à ces deux extrémités, pour pouvoir cloner le brin d'ADN dans son intégralité).  [...] Comme vous n'avez aucune idée de la carte de restriction de votre fragment, il est déconseillé de digérer par une enzyme, vous risquez de le casser. En revanche, vous pourrez toujours l'insérer dans un plasmide ouvert avec une enzyme générant une extrémité franche, sous réserve qu'il ait lui même les extrémités franche. Or vous ne savez rien de cela.  [...]

[Biologie Moléculaire] Détection adn proviral par southern blot

j'ai vu dans mon cour de biomol que une des applications du southern blot etait la detection de sequences etrangères dans un génome.  [...] pour le nombre de copie je supose qu'il y a quelque chose a voir avec l'intensité de fluorescence de la sonde apres electrophorese mais alors ca implique que 'lon connais l'entièreté de la sequence du génome du virus aussi non on risque de couper cette sequence avec nos enzymes de restriction.  [...]

digestion enzymatique

Il existe des enzymes qui peuvent, de la même façon que les endonucléases (enzymes de restriction) le font sur les acides nucléiques, couper des séquences AA en des positions spécifiques qui dépendent de certaines propriétés d'une séquence en un endroit précis (pI, certains AA précis, etc.).  [...] Il faudrait que tu trouves la séquence de ta protéine, repère les endroits ou il faut couper et vérifie si certaines de ces enzymes (ou d'autres) sont susceptibles de cliver là ou tu en aurais besoin.  [...]

[Biologie Moléculaire] inverse PCR

La RT-PCR est une technique utilisant la reverse transcriptase qui est une enzyme provenant des rétrovirus. Cette enzyme permet de transformer l'ARN en ADNcomplémentaire. La RT-PCR est donc une technique de PCR classique sur un ADNc obtenu à partir d'un ARNm.  [...] Inverse PCR. technique qui utilise des enzymes de restriction et des ligases afin de pouvoir réaliser une PCR sur un fragment d'ADN dont la séquence est en grande partie inconnue.  [...]

TPE sur l'ADN aide pour l'électrophorèse :)

pour couper l'adn je sait qu'on a l'habitude d'avoir recours a des enzymes de restriction qui sont spécifique a certaines séquence sur l'adn mais honnêtement ça me semble très compliquer de réaliser ça a votre niveau.  [...] Tu utilises des enzymes de restrictions (endo ou exonucléases) qui vont te faire pleins de petits bouts d'ADN. Tu vas faire migrer ces fragments d'adn sur membrane (électrophorèse) et tu vas avoir ce qu'on appelle un profil de migration électrophorétique.  [...]