• Forum - Séparation, Protéines, Profils

protéomique

La technique permet la séparation des protéines et l'obtention de profils très semblable aux profils de gel 2D classique, sauf qu'ici à la place des bandelettes de l'IEF, on utilise un gel 1D (SDS PAGE par exemple), on coupe la bande qui nous intéresse, puis on la fait migré sur un autre gel toujours en 1D.  [...] Il y a plusieurs possibilités. Par exemple on peut déposer des protéines issues de complexes obtenus par EMSA (=gel retard, gel shift). Cela permet de caractériser une interaction protéine-ADN.  [...]

[Biotechnologie] Pb profiles electrophoretiques de proteines decales

Apres migration des proteines, j'obtiens des profils electrophoretiques de l'echantillon en cours d'analyse. le pb que je rencontre.  [...] la tension a la meme valeur entre les 2 labos.. Ce sont des petites electrodes qui viennent tremper dans chaque puit et qui apportent une certaine tension pour la migration des proteines dans les canaux de la plaque.  [...]

[Microbiologie] Lc-ms?

Sinon, par HPLC et MS on peut analyser des differentes molecules. Dans le cas present, on peut se baser sur les proteines, par exemple, soit excretees, soit les proteines de la membrane, soit les proteines totales. Le truc c'est qu'il faut savoir les profils proteiques (ou autre metaboliques) des microorganismes pour pouvoir les identifier.  [...] Je viens de trouver ca Identification of Yersinia pestis and Escherichia coli strains by whole cell and outer membrane protein extracts with mass spectrometry-based proteomics. Dis-nous si c'est ce que tu cherches, et essaye de poser des questions plus precises, cela nous aiderait.  [...]

Electrophorèse bidimensionnelle VS unidimensionnelle

L'électrophorèse bidimensionnelle (2D-E) consiste en une séparation des protéines en deux temps. l'isoélectrofocalisation (IEF) sépare les protéines selon leur point isoélectrique (pI) puis une migration en conditions dénaturantes sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE), perpendiculairement à l'IEF, sépare les protéines selon leur masse moléculaire (MW).  [...] Après coloration des protéines séparées, on obtient un gel pouvant contenir plusieurs centaines voire plus d'un millier de spots protéiques. L'ensemble de ces spots représente le profil protéique de l'échantillon étudié (cellules, tissu, etc...). La comparaison de profils protéiques correspondant à des états particuliers, par exemple sain et malade, permet de déceler les protéines liées à ces états.  [...]

[Biochimie] Extraction et dosage des protéines

Je suis obligée de beaucoup diluer pour éviter ce dosage parasitesui de plus et inégal selon mes échantillons. En fait quand je colore au bleu de coomassie un gel contenant mes protéines après électrophorèse, je m'aperçois que je ne retombe pas sur mon dosage (certains profils protéiques sont plus intenses alors que moins concentrés que d'autres lors du dosage).  [...] De plus, lorsque vous dosez au Bradford, vous dosez les protéines libres dans votre solution. Mais avant de déposer sur votre gel vous mélangez votre solution avec du dénaturant et chauffez un peu non Vous allez alors lyser les cellules sanguines présentes encore dans votre solution et libérer les protéines qu'elles contiennent et qui n'avaient pas été dosées au Bradford.  [...]

[Biochimie] 2D LC : différence Offline vs Online

Dans les articles sur les méthodes d'études des protéines par des systèmes complexes comme LC-ESI-MS/MS, il n'est pas rare que les auteurs couplent leur système à des bases de données en ligne dédiées à des spectres de masse peptidiques. Ainsi, grâce à ce couplage, l'analyse est entièrement automatisée jusqu'au résultat final puisque l'ordinateur collecte le spectre de masse, se connecte à la base de données, compare le profil de fragmentation avec les profils préexistant et identifie la protéine.  [...] Strong Cation Exchange (SCX) Separation ConditionsFor the off-line 2D LC-MS/MS analysis, each set of labeled samples was first separated by SCX fractionation using an HP1050 high performance liquid chromatograph (Agilent, Palo Alto, CA) with a 2.1-mm-internal diameter  100-mm-length Polysulfoethyl A column packed with 5-m beads with 300-Å pores (The Nest Group, Southborough, MA) as described previously (17).  [...]

[Biochimie] Se débarasser de l'activité enzymatique résiduelle dans une cellule

Dans mon stage où je dois visualiser les profils d'acyles-CoA en LC/MS-MS, je dois traiter des culots de cellules de malade MCAD ( maladie où la protéine MCAD subit des mutations l'empêchant de dégrader des acides gras à chaine moyennes lors de la réaction de beta oxydation, et entrainant leur accumulation).  [...] Pour des dosages métaboliques en hépatocyte on lyse avec du TCA, pour précipiter toutes les protéines, et ensuite on neutralise le surnageant avant dosage.  [...]

nocivité du soja ?

bonjour, je profite de cette rubrique pour dire que mon fils de 2 an boit 2 fois par jour du lait de soja depuis l'age de 4 mois, certaines marques fabrique specialement du lait de soja pour bebe (sojasun principalement) garantie sans OGM, les pediatres le prescrivent lors d'une inolerance aux proteines animales (mon fils faisait des diahrées permanentes), et je ne pense pas que le milieu medicale recomanderait un tel regime s'il y avait un risque objectif alors que cela permet d'eviter un régime au diargal lait que l'on ne trouve qu'en parapharmacie trés cher et trés contraignant d'utilisation, cela vient de notre mentalité européenne, je rappel qu'au etats-unis par exemple prés de 30% des enfant entres 6 mois et deux ans boivent régulierement du lait de soja, qand au pays asiatique dont le soja constitue l'alimentation principal depuis plusieurs siecle je pense que les dangers auraient été remarqué bien plus tôt (meme si elle se consomme principalement fermenté).  [...] Il est largement utilisé dans l'alimentation des êtres humains et des animaux. Cependant les fèves de soja contiennent des inhibiteurs de la trypsine qui empêchent l'organisme d'absorber les protéines. Les sujets allergiques ne doivent donc pas consommer de fèves de soja crues.  [...]

Amygdaline laetrile cancer

une cellule est une cellule, si quelque chose est toxique pour une cellule de ton corps, elle le sera aussi pour les autres puisque ce sont les même mécanismes qu'utilisent les deux types de cellules pour survivre (bien que les cellules cancéreuses aient un profil d'expression proteique different, et quelques autres particularitées, mais si du cyanure empêche de fonctionner une cellule cancéreuse en bloquant ses fonctions mithochondriales, il en fera de même sur les cellules saine, et c'est a peu près la même pour tout autre composé.  [...] L'immunothérapie est encore autre chose, car là il est possible de cibler des profils protéiques spécifiques des cellules cancéreuses et faire jouer le système immunitaire pour détruire la cellule cancéreuse, mais si on regarde parmi les composés toxique naturels, pour la grande majorité des cas, si il peut diffuser dans une cellule cancéreuse il peut aussi diffuser dans une cellule saine, (a moins de devoir utiliser des canaux qui ne serait présent que sur les membranes des cellules cancéreuses, mais je ne crois pas qu'un type de canal, cancer-spécifique ait été trouvé a l'heure actuelle).  [...]

Les génériques en question

.. ont peut donc potentiellement génériquer un princeps de type comprimé en version gélule. Dans la pratique cela ne se fait pas, car à mois d'être super chanceux, réussir à développer une formule gélule ayant un même profil de libération qu'un comprimé reste très difficile.  [...] La tendance actuelle des génériquers tend à, même si la legislation ne l'exige pas, un allignement de ces profils post Cmax sur ceux des princeps.  [...]