• Forum - Séparation, Protéines, Fonction

[Biochimie] éléctrophorèse bidimentionnelle et Phi

Le gel 1, séparation en fonction du point isoélectrique, comporte un gradient de pH fixé sur l'acrylamide du gel, par exemple pH 3-10. Le gel (4X d'acrylamide/bis acrylamide) ne permet pas la séparation des protéines en fonction de leur taille du fait de la faible concentration en acrylamide.  [...] Dans le 2e gel, les protéines seront séparées en fonction de leur taille dans un gel + concentré (8 à 12%). La bandelette est simplement déposé sur le gel de 2e dimension.  [...]

Solubilité

solubilitée extraction par solvant...un soluté est plus soluble dans un solvant que dans un autre donc on peut l'extraire facilement, chromatographie...ca permet la séparation de proteines par exemple en fonction de leur solubilité, phénomène de saturation.  [...] ..precipitation qd la concentration en substance dissoute est trop importante, relarguage...trop de sels dans une solution de proteines vont faire precipiter ces proteines elles sont dénaturées. Les exemples sont tres nombreux en biologie et en chimie, a toi de choisir.  [...]

Electrophorese 2d

tu fait migrer tes proteines sur une premieres dimensions, c'est à dire une séparation en fonction d'un premier paramètre discriminant (souvent le pI, pour cela tu utilise une bande avec un gradient de pH, les proteine stopent au pH correspondant à leur pI).  [...] Tu fait ensuite migrer dans une autre dimension (gel d'agarose pour séparer en fonction de la MW) ainsi tu sépare des protéine qui ont par exemple une même taille mais un pI différent (différentes isoforme, variationd e modif secondaire...).  [...]

chromatographie / électrophorèse

Tout dépend de ce que tu veux faire. une électrophorèse sépare tes protéines en fonction de leur taille. Quant à la chromatographie il faut préciser, car tu as des chromato d'exclusion filtration sur gel (Sephadex) qui permettent la séparation en fonction du rayon de Stokes (et donc indirectement de la taille), chromato d'affinité qui permet de concentrer ton extrait protéique, chromato échangeuse d'ions qui sépare en fonction de la charge de la protéine etc.  [...] Avec une électrophorèse simple tu sépares tes protéines en fonction du poids moléculaire uniquement. Avec une chromatographie selon le solvant utilisé il me semble que tu peux séparer tes protéines en fonction de leurs charges. Je pense que ça doit être pour cela que tu utilise ces 2 méthodes.  [...]

[Biochimie] Chromatographies

la chromatographie est une méthode d'analyse, surtout pour séparer des constituants d'un mélange. par entrainement au moyen d'une phase mobile, liquide ou gaz le long d'une phase stationnaire (fixe) solide ou liquide tt ces parametre ce change selon la chose que tu veus la séparrer ( par exemple. des fragement d'ADN ou des proteines ou etc).  [...] je suis d'acord avec youyette,j'aimerai juste insister sur le principe de la chromatographie sur couche mince. c'est une téchnique de séparation des molécules ( à savoir des protéines,des lipides...etc) en fonction de leur hydrophobicité,bien sur en présence de standars,et vous aurez par la suite à calculer les rapports frontaux de ces molécules et déduire à quoi correspond notre protéine ou lipide.  [...]

[Biochimie] Electrophorèse en condition dénaturante et native

1°) la première va se faire alors que la protéine a été chauffé et n'est plus en condition native, fonctionnel. celle-ci va dépendre seulement de la masse de la protéine.  [...] Je pense que lors de l'électrophorèse en conditions natives, la protéine est séparée en fonction de sa charge et de son poids moléculaire(PM) d'où la migration en deux bandes A et B. Quant à son électrophorèse en présence de SDS, la séparation de la protéine est en fonction de son PM seulement, je me trompe.  [...]

[Biotechnologie] Global Analysis of Protein Activities using proteome chips

Ce sont les noms des protéines. Sur le côté gauche, tu as le nom des protéines interagissant avec les lipides, en haut à gauche, le type de lipide, au milieu la quantification de l'interaction (la séparation fort ou faible vient de se paramètre), à droite la localisation de la protéine dans la membrane cellulaire, si c'est une kinase ou si sa fonctio est inconnu.  [...] Le problème avec la protéomique, ou l'étude du protéome, c'est que techniquement, c'est très difficile à réaliser. Principalement à cause des modifications post-traductionnelles de la protéines, ce qui peut changer sa fonction.  [...]

Rôle de l'EDTA dans dans l'isolement de l'ADN

De l'EDTA dans une solution de solubilisation cellulaire va permettre, en chélatant les cations bivalents (Mg2+. Ca2+), de rompre les jonctions entre les cellules à dissocier d'un tissus (ici les tissus du thymus). En éffet, Les protéines permettant la jonction cellulaire (ex.  [...] cadhérines) fonctionnent en présente de ces cations. Le faite de les chélater (les cations) entraîne donc une inefficience des protéines de jonctions, et donc une séparation des cellules d'un tissus.  [...]

Rôle de SDS dans la séparation des protéines par électrophorèse

Pour schématiser, les protéines vont toutes être droites sur la même ligne de départ et elles ne vont migrer qu'en fonction de leur poids moléculaire, les plus légères iront plus loin que les plus lourdes.  [...] + Le SDS va donner une charge négative à toutes les protéines, donc elles vont migrer du pôle négatif vers le pôle positif en fonction de leurs poids moléculaire dans le gel d'électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] SDS page

le role de ce support est multiple car le SDS est aussi un dénaturant, calibré à une certaine concentration, il va permettre de faire migrer les protéines/ADN (car c'est plutot le courant qui fait migrer) mais avec le calibrage (et des marqueurs), les protéines/ADN vont migrer jusqu'a atteindre leur poids moléculaire.  [...] SDS (Dodecyl Sulfate de Sodium) dénature la macromolécule et la charge négativement, permetant donc la séparation en fonction du poids moleculaire.  [...]