• Forum - Séparation, Bandes, Fonction

Acides Nucléiques

L'ADN est chargé négativement. La séparation se fait en fonction de la taille des fragments qui diffère d'un seul nucléotide entre chaque bandes les plus proches visible sur le gel.  [...] Salut. Au moment de la migration, la charge est identique pour chaque fragment d'ADN car la préparation de ton ADN pour l electrophorese sert justement a masquer la charge réel de tes fragments afin que ces derniers aient tous la même charge fictive et migrent uniquement selon leur poid moléculaire.   [...]

[Biochimie] differencier deux gel d'agarose de concentration différente

l'utilisation de gel d'agarose à forte concentration (3 à 4%) est nécessaire pour des fragments inférieurs à 150 pb, car elle permet une meilleure séparation et résolution des différentes bandes en fonction de leur différence de taille.  [...] A l'inverse il faudra que le gel soit peu concentré pour séparer des gros fragments (simplement pour leur permettre de passer à travers du gel), mais dans ces conditions on perdra les petits fragments qui migreront tellement qu'ils risquent de sortir. Tout est affaire de choix par rapport à ce que tu souhaites faire migrer, pour l'ADN il existe des tableaux indicatifs donnant la gamme de pourcentage en agarose adaptée en fonction de la taille du ou des fragment(s) d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Page sds

plus le voltage est élevé, la séparation des bandes est rapide mais lors de la révélation la séparation des bandes sera moins nette. Pour certains protocoles nous réalisons des migration à faible voltage durant plusieurs heures.  [...] Pour répondre à ta question, c'est la magie du SDS. Le SDS va se coller (à l'aide de pont hydrogène, si je ne me tyrompe pas) sur la protéine dénaturée, et va ainsi masquer les différentes fonctions chargées de la protéine. Et sachant que le SDS se fixe sur la protéine avec un ratio constant (1.  [...]

Electrophorese 2d

tu fait migrer tes proteines sur une premieres dimensions, c'est à dire une séparation en fonction d'un premier paramètre discriminant (souvent le pI, pour cela tu utilise une bande avec un gradient de pH, les proteine stopent au pH correspondant à leur pI).  [...] Tu fait ensuite migrer dans une autre dimension (gel d'agarose pour séparer en fonction de la MW) ainsi tu sépare des protéine qui ont par exemple une même taille mais un pI différent (différentes isoforme, variationd e modif secondaire...).  [...]

[Biologie Moléculaire] SDS page

Salut, le SDS a pour fonction dans une electrophorese de supprimer le facteur charge dans la migration et de faire en sorte que les composants les plus legers migrent le plus haut et les plus lourds migrent le moins.Sa permet de pouvoir determiner le poids momeculaire des composants identifiés si on en connait un.  [...] SDS (Dodecyl Sulfate de Sodium) dénature la macromolécule et la charge négativement, permetant donc la séparation en fonction du poids moleculaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Personnellement ce genre de bandes me fait plus penser à des problèmes de concentration ou alors a des impuretés dans le gel. Tu as essayé avec une autre poudre d'agarose pour voir si ça faisait pareil.  [...] Migration trop rapide. pour un gel analytique, on conseille 5V/cm maxi en TBE 1X (3-4V/cm en TAE 1X). Pour un gel préparatif, il peut être utile de se limiter à 0.5-1V/cm à 4°C (pour limiter la diffusion).   [...]

[Biochimie] électrophorèse SDS PAGE

Je travaille avec des protéines recombinantes. Avant j'avais des bandes extraordinaires et bien claires ms dernièrement la séparation ne se fait pas comme il faut et n'arrive pas au front de migration.  [...] Je dépose pr le moment juste le marqueur de poids moléculaire ms j'obtiens que des bandes sérées et très proches et qui restent en haut du gel de séparation.  [...]

[Biochimie] éléctrophorèse bidimentionnelle et Phi

La réponse est simple. en pratique ce sont deux gels différents, le SDS PAGE est fait ) partir d'une bande issue de la migration e fonction des pHi. Suis assez clair.  [...] Le gel 1, séparation en fonction du point isoélectrique, comporte un gradient de pH fixé sur l'acrylamide du gel, par exemple pH 3-10. Le gel (4X d'acrylamide/bis acrylamide) ne permet pas la séparation des protéines en fonction de leur taille du fait de la faible concentration en acrylamide.  [...]

[Biologie Cellulaire] Ultracentrifugation

Bonjour, j'aimerais une petite précision sur l'ultracentrifugation. Je voudrais savoir sur quel paramètre s'appuie cette méthode C'est-à-dire qu'il y a séparation en fonction de la masse, ou de la densité, ou quel paramètre.  [...] C'est une séparation en fonction de la densité. C'est un genre de décantation accélérée en quelque sorte. Le fait de centrifuger exacerbe les différence de densité des différents constituants d'un mélange et permet leur séparation rapide. Par exemple, lorsque dans un tube tu mets un liquide qui formera un gradient de densité, du plus dense au fond au moins dense en surface, tu pourras séparer par exemple les constituants d'une cellule qui iront se placer au cours de la centrifugation à l'endroit ou leur densité est égale à celle de ton support.  [...]

[Biochimie] Problème avec mon western

Mais quand j'ai déshybridé la membrane pour hybrider l'actine, à la révélation c'était la catastrophe, j'ai eu presque pour tous les puits des mi bandes, comme si les puits étaient remplis qu'à moitié avec les protéines... je ne comprend vraiment pas.  [...] Et puis, avec ma première révélation j'avais des bandes entières mais après déshybridation (PBS-Tween pendant 2) il n y'a plus que des moitiés.. (enfin en ce qui concerne l'actine).  [...]