• Forum - Sens, Plasmide, ARN

[Biologie Moléculaire] ARN interference

Un ARN antisens, concernant les eucaryotes est généralement introduit comme cité plus haut de manière artificielle, en tout cas, les plantes et invertébrés n'ont pas intérêt à en produire, car si cela arrive, il va se lier à l'ARN messager sens présentant la séquence complémentaire et cela induira un ARN db pris en charge par Dicer 2 (invertébré) et DCL-2 et DCL-4 (plantes) qui vont alors mettre en place toute la machinerie du RNAi et alors conduire à l'extinction définitive de ce gène chez l'organisme.  [...] taper Romby (IBMC, Strasbourg) et CopT sur pubmed) ou encore permettant d'amorcer la réplication du plasmide ColE1... ce sont donc les seuls organismes qui codent pour des ARN @sens, découvert à ce jour.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux questions d'annales PCEM1

Pour cela, vous devez isoler une région spécifique du long transcrit que vous allez pouvoir insérer en anti sens dans un plasmide afin de produire votre ARN anti sens.  [...] Il vous faut l'insérer en sens inverse par rapport au promoteur, il vous faut donc un plasmide. promoteur-BamH1-Pst1. C'est le plasmide P1.  [...]

[Biologie Moléculaire] ARN antisens à partir d'un fragment de gène

Un plasmide vecteur de clonage créé artificiellement peut avoir autour de son MCS (Multiple Cloning Site) deux promoteurs différents (phages T7 et SP6), ce qui peut donner lieu à deux ARN (un sens et un antisens), selon que le démarrage de la transcription se fasse à un promoteur ou à l'autre.  [...] Ce plasmide sera utile car fournisseur de sondes pour des Northern blot (Southern blot pour de l'ARN et non plus de l'ADN) ou de la transcription traduction artificielle comme expliqué ci-dessus.  [...]

[Microbiologie] virus

Bonjour est ce que la résistance des antiviraux est du au plasmide comme pour les les antibiotiques.  [...] Non c'est dû à des mutations du virus (très fréquentes pour les virus à ARN). La notion de plasmide n'a aucun sens pour les virus.  [...]

génie génétique

Bonjour à tous, lorsque l'on veut insérer un fragment de restriction dans un plasmide pour pouvoir produire des clones, si ce fragment a 2 extrémités identique il pourrait se combiner avec extrémité du plasmide dans un sens aussi bien que dans l'autre alors comment grâce à enzyme de restriction peut-on choisir dans quel sens on veut que ce fragment se positionne.  [...] Pour répondre mainteant à la question (ouf), tu peux réaliser une cartographie de restriction puis sortir ta petite calculette pour vérifier si ton plasmide à intégrer ta séquence en sens ou antisens.  [...]

[Biologie Moléculaire] Régulation de la réplication bactérienne

Je ne connaissais pas cette protéine Rop alors j'ai fait des recherches. En fait elle n'intervient pas dans la réplication du chromosome bactérien mais dans celle des plasmides. C'est bien de ça dont tu parlais hein.  [...] D'après ce que j'ai lu, la réplication commence si l'ARN II entre dans la bulle de réplication au niveau de l'ori du plasmide et qu'il est clivé par la RNase H. Mais ceci arrive peu fréquemment. Dans la plupart des cas, l'ARN I va s'hybrider à l'ARN II et apparemment Rop (sous forme dimérique) facilite cette hybridation.  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

merci pour votre reponse,oui effectivement, mais au fait vous m'avez mal compris, quand j'ai dit sens ou anti sens c'été par rapport a une cartographie de restriction, on a un brin d'ADN qui a été placé dans le plasmide (on sais pas si il a été placé dans le bon sens), on ajoute une enzyme de restriction ((ECOr, bamhI.  [...] dans le cours c'était que le plasmide n1 a été dans le bon sens mais le 2 eme était anti-sens, mais je ne sais pas comment il (prof) definit que c'était sens ou anti sens juste avec les tailles.  [...]

hybridisation in situ et immunomarquage

Quand tu fais ta sonde tu vas transcrire ton insert à partir de ton plasmide selon une origine de transcription antisens mais tu vas aussi faire la sonde sens (avec une origine de transcription dans l'autre sens. Normalement on s'arrange pour avoir les deux dans le plasmide pour les in situ) ce fera ton controle.  [...] Sinon, je pense que decoupler les deux manips hybridation in situ et immuno est nettement moins problematique. D'apres ce que j'ai pu entendre (jamais tenter personnellement), la combinaison des deux est au mieux, pas une partie de plaisir, au pire incompatible.   [...]

[Biologie Moléculaire] Contamination d'ARN par de l'ADN

Le test que je suis en train de réaliser consiste à extraire les ARN totaux d'une souche et de rajouter à l'extraction une quantité de plasmide précise (je précise que je cherche les ARNm correspondant à la transcription de mon plasmide). Cette quantité de plasmide est soit DNasée soit non DNasée puis une PCR sera réalisée directement sur ARN (sans RT), cela me permettra de jauger l'efficacité de la DNase du moins je l'espère.  [...] Les essais ont révélés que la DNase du kit Machery Nagel ne fonctionnait pas assez sur colonne (amplification en PCR du plasmide ajouté pendant l'extraction d'ARN). Dans la notice de cette DNase il est précisé qu'en cas de grosse quantité d'ADN, il faut utiliser la DNase après colonne puis réaliser un clean up.  [...]

[Biologie Moléculaire] plasmide

un chercheur clive une molécule d'ARN plsamidique contenant N nucléotide en différent fragment à l'aide d'une endonucléase spécifique, Quel est le nombre total de fonction -OH libre portés par l'ensemble des pentoses.  [...] c'est probablement de l'ADN pas de l'ARN. la réponse n'a pas de sens en effet, intuitivement je dirais que tu t'es planté dans l'énoncé, N doit representer le nombre de sites spécifiques de clivage par ton endonucléase.  [...]