• Forum - Sélection, Cellules, Transgene

[Biochimie] G418, neomycine, puromycine....

Je dois transduire des cellules avec le transgene GFP. Je souhaite selectionner les cellules GFP positives sans avoir a passer par le FACS, juste en utilisant un agent de selection comme le G418.  [...] Au meme moment que je les transfecte avec les plasmides MD.G/Dr8.91 et GFP je pourrais ajouter un vecteur lentiviral porteur du gene de resistance.   [...]

[Génétique] Production de souris transgéniques

Quand on fait de la recombinaison homologue, on transfecte des cellules ES avec l'ADN d'intéret. Par homologie, l'ADN s'intègre à l'endroit qu'on veut dans le génome. grâce à une sélection seules les cellules qui ont reçu le transgène au bon endroit survivent.  [...] Comme je l'ai dit, on utilise la recombinaison homologue pour de petits fragments d'ADN dans le cas de transfection de cellules ES, afin de cibler une intégration précise dans le génome.  [...]

[Biologie Moléculaire] gene de resistance a la kanamycine

je voudrais savoir ou je pourrais trouver la localisation précise du gène de résistance a la kanamycine,utilisée en biologie moléculaire pour la sélection de cellules bactériennes comportant un transgene.  [...] Aux vues de vos questions, qui traduisent une certaine confusion, je me permets de vous demander, quel est votre connaissance de la biologie moléculaire Que voulez vous faire exactement.   [...]

[Biologie Cellulaire] Compter les passages

En ce qui concerne la perte des protéines, s'il s'agit de transfectants stables, il est possible que l'expression du transgene diminue dans le temps, soit parce que les métabolites secondaires produits par la cellule inhibent le promoteur, soit parce que les cellules inactive le transgène.  [...] Le fait de décongeler un tube de cellules congelés juste après l'établissement des clones, en refaisant une sélection à l'antibio à la décongélation permet de repartir d'une culture ou toutes les cellules expriment le transgène.  [...]

[Biologie Moléculaire] [biologie moléculaire] Le clonage thérapeutique

A ce propos, une question me vient a l'esprit, est ce que quelqu'un sait si c'est une population clonale qui est reintroduite ou juste l'ensemble des cellules ayant integre le transgene (j'ai mon idee sur la reponse mais j'ai la flemme d'aller verifier la reponse 8)).  [...] Il y a effectivement une selection afin de ne recuperer que les cellules ayant integrees le transgene, seulement ensuite il n'y a pas de clonage de la cellule. Autrement dit on re-injecte differents clones possedant le transgene. chacunes de ces cellules posseant donc un transgene integre a un loucs different.  [...]

[Evolution] Apparition du sonar

Cette hypothèse me semble peu probable. Peu d'organes ne servent à rien, et lorsque ça arrive, c'est temporaire en attendant soit sa disparition, soit sa réaffection à quelque autre tâche. Et à ma connaissance, aucun organe n'a jamais été développé inutilement.   [...] Par servir à rien, réellement provocateur dans un contexte évolutionniste, j'entendais servir peu (encore une hypothèse car la détection des ultra-sons peut apporter un avantage évolutif même si l'espèce est incapable d'en émettre, pourquoi pas). Quand on voit que des cellules ayant un transgène intégré de façon stable arrivent à le faire sauter s'il leur sert à rien (plus de pression de sélection), la vie est clairement contre la dépense énergétique inutile.  [...]

[Biochimie] Plein de questions de bioch

Les cellules transgèniques ont participé à la formation de tous les tissus y compris les cellules germinales. Du coup on peut avoir des gametes Tg.  [...] Tg x + ==. Tg/0 Vous obtenez une souris portant une copie du transgène dans toutes ces cellules. C'est ce que l'on appelle communément la souris transgénique (même si la chimère est déjà une souris transgénique, mais son statut d'intermédiaire fait qu'on la différencie généralement de la souris transgénique que l'on cherche à produire).  [...]

selection de cellules par la technique de l'hybridation in situ

Je ne comprends pas tres bien la technique d'hybridation in situ, pour observer si un mRNA particulier est exprimé au sein d'un tissu ou d'une cellule, il faut bien faire éclater les cellules. Et parfois on nous dit que ça nous permet de voir quelles cellules ont intégré un transgène par exemple et de les sélectionner.  [...] L'hybridation in situ se fait effectivement sur des cellules mortes, sur lame, car il faut perméabiliser la membrane pour pouvoir faire rentrer les sondes... Les sondes sont des ARN complémentaires de ton ARN cible, couplées à un fluorophore par exemple, ou alors c'est des sondes chaudes (radioactives).  [...]

animal transgénique homozygote

Tu peux peut -être plutôt modifier directement ton embryon au stade cellule unique, ce qui permet d'avoir le transgène dans toutes les cellules.  [...] Pour effectuer la transgénèse tu as besoin de cellules qui se divisent, donc on utilise des cellules ES, on screen plusieurs centaines de clone (par PCR) et l'on injecte l'embryon.  [...]

Transgénèse d'une bactérie

Autrement on doit pouvoir faire en sorte d'utiliser un plasmide non réplicatif et qui se transmet peu (ou pas), et dans ce cas ça se perd. Mais je vois pas trop l'interêt.   [...] Dans le cas d'un transgène permettant une résistance, il se perd assez vite si t'enlèves la pression de sélection.  [...]