• Forum - Sélection, Bactéries, Plasmide

géne sauvage

dans une question en génie génétique j'ai trouvé la phrase suivante.quelles propriétés doit avoir le milieu qui permet la sélection de bactéries renfermant un plasmide possédant un gène lys A sauvage.  [...] On parle parfois d'allèle sauvage pour désigner l'allèle le plus répandu, par opposition à l'allèle mutant qui désigne un allèle rare auquel on s'intéresse. En anglais on parle de wild type. Je pense que cette terminologie vient du temps où on provoquait des mutations chez des drosophiles, et donc l'allèle sauvage était celui que portaient les mouches sauvages qu'on pouvait capturer en-dehors du labo (mais je m'avance peut-être là).   [...]

[Biologie Moléculaire] Sélection de bactéries

je voulais savoir pourquoi fait on une sélection avec de la kanamycine des bactéries transformées avec un plasmide comportant un gène de résistance à la neomycine.  [...] ah ok, on peut donc utiliser indifferement la kanamycine ou la néomycine.   [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

Donc dans l'ordre, tu clones ton gène recombinant dans ton vecteur, tu transformes une cellule de E. coli avec ton vecteur, tu la fait pousser sur un milieu contenant un antibiotique, du X-gal et de l'IPTG. Si la colonie devient bleue, c'est que le vecteur se trouve dans la cellule, mais que le gène LacZ est intact, donc l'insertion du gène recombinant n'a pas fonctionné.   [...] ensuite lors de la sélection des clones recombinantes(les bacteries ayant incorporé un vecteur recombinant)on ajoute autre que l'antibiotiqe,de l'x-gal (incolore)qui vas etre cliver par le beta galogtosidase toute en produisant une coloration bleue,donc l'obtension de cette coloration indique qu'on est en présence des bacteries trasformeés par un plasmide intact.  [...]

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

J'ai aussi compris que la sélection à la base de l'ampicillin va nous permettre de distinguer entre bactéries qui n'ont rien incorporé et bactéries qui ont incorporé un plasmide et la tetracycline va nous permettre de distinguer entre plasmide recombiné et non recombiné.  [...] Ma question est la suivante. la selection à la base de la tetracycline ne va-t-elle pas tuer les bactéries ayant incorporé le plasmide qui porte l'ADN dont on a besoin.  [...]

Plasmide et gène LacZ

Pour cela on utilise un gène de sélection. Le plasmide ci-dessus possède un gène Ampr, qui procure à la bactérie un caractère de résistance à un antibiotique. l'ampicilline. En milieu contenant de l'ampicilline, seules les bactéries ayant intégré le plasmide pourront survivre.  [...] Une fois les bactéries sélectionnées, il va falloir purifier les vecteurs, afin que l'ADN soit exempt de toute protéine, de tout ARN ou d'une quelconque contamination chimique. Puis, avant de commencer les expériences proprement dites, on transfecte les plasmides dans les cellules qui nous intéressent.  [...]

Plasmide recombinant

L'ampicilline est l'antibio classique qui permet de sélectioner les bactéries qui contiennent le plasmide quand tu les transformes (seuls poussent les bactos qui ont le plasmide). C'est l'étape de la contruction et de la sélection.  [...] cette sélection s'effectue en étalant les bactéries transféctées sur une boite d'agar contenant la Tet, toutes les colonies obtenues de cette façon contiennent un plasmide.ces colonies résistantes sont ensuites téstées pr leur capacité de croitre sur un milieu contenent l'Amp.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

En étudiant la structure d'un plasmide servant a faire de la transgénèse via agrobacterium, j'ai rencontré un soucis avec la structure du gène de résistance. Le gène utilisé est le gène de résistance a la kanamycine, NPTII (pour néomycine phosphotransférase II).  [...] Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] Par pression de selection AB sur les bacteries, je vais pouvoir selectionner uniquement les colonies bact qui ont integrer mon plasmide (qui a un gene re resistance a la selection).  [...]

Probleme d'induction de GST dans bacterie

Le protocole est assez classique. transformation de bactéries avec 5ng de plasmide par choc thermique et sélection sur pétrie avec d'ampicilline.  [...] J'avais eu le même probléme l'année derniére, en plus moi je faisais des litres de culture, je ne te raconte pas la galére. Pour moi c'était. BL21 Star(DE3), plasmide pGEX-2T avec fusion GST-toxine bactérienne, promoteur tac et induction á l'IPTG. Finalement la solution dans mon cas pour avoir une assez bonne quantité de protéines recombinantes, était d'induire á une DO tardive de 1.  [...]

[Génétique] Gène inconnu

Tout ce que tu en tireras c'est qu'en transfectant la bactérie avec un plasmide contenant le gène d'intérêt pour peu que tu arrives à l'amplifier, le cloner etc. (et toutes ces manips ne sont pas gratuites, vas te falloir le matos pour le faire), tu observeras qu'elle pète aussi bien à 100° que sans le plasmide.  [...] culture de la ligné 1 (portant le plasmide) et de la lignée 2 (pas de plasmide) sur milieu sélectif. Les bactéries 1 répondent à la sélection, pas les bactéries 2.  [...]