• Forum - Sélection, Bactéries, Plasmide

[Biologie Moléculaire] Selection de bactéries par Antibiotiques lors du clonage d'ADN

J'ai aussi compris que la sélection à la base de l'ampicillin va nous permettre de distinguer entre bactéries qui n'ont rien incorporé et bactéries qui ont incorporé un plasmide et la tetracycline va nous permettre de distinguer entre plasmide recombiné et non recombiné.  [...] Ma question est la suivante. la selection à la base de la tetracycline ne va-t-elle pas tuer les bactéries ayant incorporé le plasmide qui porte l'ADN dont on a besoin.  [...]

géne sauvage

dans une question en génie génétique j'ai trouvé la phrase suivante.quelles propriétés doit avoir le milieu qui permet la sélection de bactéries renfermant un plasmide possédant un gène lys A sauvage.  [...] On parle parfois d'allèle sauvage pour désigner l'allèle le plus répandu, par opposition à l'allèle mutant qui désigne un allèle rare auquel on s'intéresse. En anglais on parle de wild type. Je pense que cette terminologie vient du temps où on provoquait des mutations chez des drosophiles, et donc l'allèle sauvage était celui que portaient les mouches sauvages qu'on pouvait capturer en-dehors du labo (mais je m'avance peut-être là).   [...]

[Biologie Moléculaire] Sélection de bactéries

je voulais savoir pourquoi fait on une sélection avec de la kanamycine des bactéries transformées avec un plasmide comportant un gène de résistance à la neomycine.  [...] ah ok, on peut donc utiliser indifferement la kanamycine ou la néomycine.   [...]

[biologie moléculaire] Opéron lactose

L'IPTG est utilisée notement en biotechnologie dans les cas de productions de protéines recombinantes par un vecteur d'expression que l'on fabriquera avec un gène d'une protéine fusion (le gène lacZ ds ce cas ci) qui permettra une lecture du gène controlée et donc une production controlée de la protéine cible.   [...] ensuite lors de la sélection des clones recombinantes(les bacteries ayant incorporé un vecteur recombinant)on ajoute autre que l'antibiotiqe,de l'x-gal (incolore)qui vas etre cliver par le beta galogtosidase toute en produisant une coloration bleue,donc l'obtension de cette coloration indique qu'on est en présence des bacteries trasformeés par un plasmide intact.  [...]

Plasmide et gène LacZ

Pour cela on utilise un gène de sélection. Le plasmide ci-dessus possède un gène Ampr, qui procure à la bactérie un caractère de résistance à un antibiotique. l'ampicilline. En milieu contenant de l'ampicilline, seules les bactéries ayant intégré le plasmide pourront survivre.  [...] Une fois les bactéries sélectionnées, il va falloir purifier les vecteurs, afin que l'ADN soit exempt de toute protéine, de tout ARN ou d'une quelconque contamination chimique. Puis, avant de commencer les expériences proprement dites, on transfecte les plasmides dans les cellules qui nous intéressent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Pour choisir un vecteur, il te faut regarder la force de l'origine de réplication (qui détermine le nombre de copies de plasmide dans la bactérie), les résistances aux antibiotiques (sélection des bactéries intégrant le plasmide), la présence d'autres marqueurs de sélection comme la beta-galactosidase, le type de système d'expression (promoteur euca/procaryote, RBS pour traduction chez procaryote,  [...] Pour ce qui est finalement du choix du vecteur, il te faut un vecteur contenant une origine de réplication procaryote, un gène de résistance à un antibiotique et pourquoi pas le gène beta-galactosidase à cheval du polylinker (cela permet de sélectionner les bactéries qui ont un plasmide ayant intégré un insert), et bien sûr le polylinker.  [...]

Plasmide recombinant

L'ampicilline est l'antibio classique qui permet de sélectioner les bactéries qui contiennent le plasmide quand tu les transformes (seuls poussent les bactos qui ont le plasmide). C'est l'étape de la contruction et de la sélection.  [...] cette sélection s'effectue en étalant les bactéries transféctées sur une boite d'agar contenant la Tet, toutes les colonies obtenues de cette façon contiennent un plasmide.ces colonies résistantes sont ensuites téstées pr leur capacité de croitre sur un milieu contenent l'Amp.  [...]

mode de resistance aux antibiotiques

En plus, pour sélectionner les bactéries qui ont incorporé le plasmide avec le gène d'intérêt, on met sur ce même plasmide un gène de résistance à un antibiotique. On met en culture les bactéries dans un milieu avec l'antiobiotique en question (sélection artificielle) pendant une nuit.  [...] Cette pratique est fortement critiquée parce qu'on donne sciemment la résistance à l'antibiotique à une bactérie. Mais d'autres marqueurs de sélection sont en cours de conception (par exemple, mettre dans le plasmide un gène permettant à la bactérie d'utiliser un sucre inédit, comme le xylulose).  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

En générale YFG est couplé à un gène rapporteur (qui permet la sélection des plasmides qui intègrent effectivement YFG). C'est souvent un gène de résistance chez les bactéries. Ainsi lorsqu'on place les bactéries qui ont intégré le plasmide dans un milieu avec antibiotique, ce sont celles qui survivent qui on intégré YFG étant couplé audit gène de résistance à l'antibio.  [...] petit détail, la sélection des bactéries par l'ampicilline sert à savoir si la bactérie possède le plasmide, mais cela ne donne pas d'indication si le gène codant la protéine a bien été inséré dans ce vecteur.  [...]

Faire suivre une promoteur eucaryote et procaryote

En étudiant la structure d'un plasmide servant a faire de la transgénèse via agrobacterium, j'ai rencontré un soucis avec la structure du gène de résistance. Le gène utilisé est le gène de résistance a la kanamycine, NPTII (pour néomycine phosphotransférase II).  [...] Dans la construction du plasmide il est précédé du promoteur du CaMV 35S. Cependant pour réaliser la selection des bactéries transformé puis des cellules végétales transformé, on a besoin de l'expression de NPTII à la fois dans les bactéries et les cellules eucaryotes.  [...]