• Forum - Sang, Humain, Tampon, Acide

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Je suis d'accord avec Annaick_R. Essaye du tampon 1x ou 0.5x avec une concentration d'agarose de 0.8% sur un petit gel, voir même 0.6% comme dit plus haut. Ton kit de lambda digéré c'est un vecteur c'est bien ça Donc s'il est digéré tu devrais voir une bande assez haut sur ton gel (dans les 2kb environ) et tu peux laisser migrer moins longtemps.  [...] Merci pour tous ses renseignements. J'ai fait un nouvel essai. nouveau tampon dilué 10X, nouveau gel à 0.8%, mais cette fois-ci j'ai inséré un rhéostat pour limiter le courant... Une heure de migration et le résultat était plutôt bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

tu dis que tu purif sur colonne avant de déposer. Tu le fais systématiquement Car ca ressemble à une migration d'ADN dans un tampon un peu spécial qui modifie la migration. Quand je dis tampon spécial c'est le conditionnement de ton ADN par rapport à de l'eau.  [...] Je suis d'accord avec Mantos, soit tu as une concentration en sels trop importante, soit c'est que tu as dans ton tampon d'élution de ta colone des traces plus ou moins importantes de ta solution de lavage de la colone. Ca se produit notamment quand apres les lavages tu ne prends pas soint d'éliminer toute trace de liquide entre le tube collecteur et la colone.  [...]

Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.  [...] Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -. mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire le noyau devient tout petit et finit par éclater aussi.  [...]

[Biochimie] Protocole de TP un peu flou

J'ai un tp de biochimie la semaine prochaine,je suis en train de le preparer j'ai compris le but qui est de tracer des spectres d'absorption de 3 acides aminés pour etablir leur coefficient.  [...] Reviendrai à. Prélever 2ml de la solution de Phe, puis l'introduire dans une fiole jaugée de 10ml et de compléter le volume jusqu'au trait de jauge avec la solution de tampon phosphate.  [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

Vous placez des bandes d'acétate dans un tampon tri-véronal (200 ml pour trois bandes) pendant 10 à 20 minutes puis vous essorez l'excès de tampon en plaçant les bandes entre deux feuilles d epapier absorbant.  [...] bonjour, étudiant en 2eme année de licence, j'ai fait une electrophorèse sur gel de polyAA en présence de tampon tri veronal. Quelqu'un sait quel est le pH de ce tampon ce n'était pas marqué dans le protocole et j'en ai besoin pour le compte rendu.  [...]

Problème de migration SDS-PAGE

L'expérience consiste, dans un premier temps, à dénaturer les protéines dans de l'urée 8M + DTT 5mM, puis à les renaturer par l'utilisation d'un tampon (TrisHcl, NaCl et EDTA), une centrifugation est ensuite réalisée, le surnageant correpondant à ma fraction soluble est concentrée par evaporation et mon culot correspondant à ma fraction agrégée est resuspendu dans un peu de tampon de dénaturation (Urée 8M + DTT 5mM) et Laemmli Buffer 5X.  [...] il semble que j'ai résolu le problème qui n'était autre que l'urée... En effet je dénature avec de l'Urée 8M puis renature avec un tampon (TrisHCL, NaCL, EDTA) puis je concentre ma protéine par evaporation, l'urée reste donc à trés forte concentration à la fin de l'évaporation.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

En gros pour faire c que tu veux faire, il faut un tampon classique d'extraction (Tris, Nacl, Triton, quelques inhibiteurs de phosphatase et de protéases). La difficulté est due a la taille de la FAS (230kDa je crois) donc il faudra faire un gel peu concentré (genre 8%) pour celle la et un plus concentré pour IR (10 ou 12%).  [...] Pour les extraits, j'utilise ce protocole sur du foie et sur des cellules, ça revient au même. Il faut faire attention a ne pas mettre trop de tissu dans le tampon, l'idéal étant de peser environ 30mg pour voir ce que ça fait. Grosso modo, une tete d'allumette dans 500µL et tu as de quoi faire des centaines de western.  [...]

extraction ADN

je fait de l'extraction d'ADN avec TE, lysozyme, SDS, isopropanol et éthanol mais j'obtiens un ADN pas très propre (. 1 au spectro). on m'a dit de rajouter une étape avec le chloroforme mais celui nécessite une hotte chimique ce qu'on a pas. je voulais donc savoir par quoi on pourrai le remplacer.   [...] par contre tu as un autre protocole, pas cher et inspiré des kits. la lyse alcaline, l'idée étant de récupérer du tampon P1 en trop dans les kits de midiprep ou maxiprep.  [...]

[Biochimie] dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

1- Pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace (4C°). Pour quoi broyer le tissus+tampon dans la glace Pour quoi le centrifuger à (4C°) Après la centrifugation, est ce qu'on doit remettre le tube dans le froid, jusqu'à la provocation de la réaction dans l'étuve du spectrophotomètre.  [...] Je pense que pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace 4C°,c'est pour inactiver l'enzyme(par le froid) et éviter l'augmentation de la température du tissu lors du broyage et de ce fait éviter la dénaturation de l'enzyme, car une enzyme soumise a basse température est inactivé mais elle n'est pas dénaturée (et qui est donc de ce fait détruite comme dans le cas d'une haute température).  [...]

[Biochimie] Centrifugeuse différentes vitesses

Pour faire le dosage d'une enzyme la catalase, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 9000 g pour avoir la fraction mitochondriale (contient les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes).  [...] Pour faire le dosage d'une protéine Métalothionine, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 30000 g pour avoir la fraction microsomale (contient les rybosomes et les réticulums endoplasmiques).  [...]