• Forum - Rôles, Extraits, Levures

[Biologie Moléculaire] compatibilité OriS et Ori de PMB1 dans un même plasmide?

le but c'était de faire des recombinaisons chez la levure et de pouvoir électroporer directement le YAC dans les bactéries. Le vecteur possède 2 ori procaryotes car je l'ai construit en ligant des fragments de deux vecteurs différents (et je croyais avoir supprimé une des 2 oris mais après séquençage elles y sont toutes les deux).  [...] J'ai obtenu des colonies de bactéries qui ont poussé avec ce plasmide. Ensuite j'ai prcoédé à des recombinaisons chez la levure et j'ai électroporé les YACs extraits de la levure dans des E. coli DH10bêta. Et là j'ai des résultats bizarres, je ne sais pas si je n'ai pas perdu l'insert, car j'avais des colonies positives (criblage pcr) et après une maxi prep, j'ai obtenu de bonnes quantités d'ADN mais plus de réponse par PCR.  [...]

[Biologie Moléculaire] Nettoyage d'ARNs & Transfert de protéines

Mais ma première question concernait les échantillons que j'ai déjà extraits en fait. Ils sont un peu précieux et je voudrait les nettoyer plutôt que de refaire la manip.  [...] Je ne voudrais pas casser la fête mais en général pour les ARN on considère que les extraits sont propres quand 1.7. DO. 2 (1,7 étant la limite basse d'acceptabilité et 2 étant le Saint Graal. Une bonne extraction donne des DO de l'ordre de 1.8). Quand vous annoncez une DO.  [...]

[Biologie Cellulaire] Apoptose et méthanol

Voilà j'ai un petit problème. Je suis en M1 (donc toute débutante dans les vraies manip) et je traite des cellules avec un produit (le CCCP) dilué dans du méthanol pour observer la morphologie du réseaux mitochondrial. Je fais des témoins négatifs en ne traitant mes cellules qu'avec du méthanol.   [...] Et voilà que j'observe des choses quelque peu étranges... après 1h30 de traitement mes mitochondries sont hyperfilamenteuses (par rapport à des cellules Non traitées) et après 3h ces fameuses petites mitochondries commencent à se fragmenter. Alors voilà quelqu'un aurait-il une idée de l'action que pourrait avoir le méthanol sur les cellules je ne trouve pas d'articles scientifiques correspondant.   [...]

[Biochimie] etude de proteine de liaison à l'ADN

A priori je dirai immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), dont le principe consisite à fixer la séquence d'ADN à laquelle tu t'intéresse sur des billes d'une colonne de chromato, puis à faire passer dans cette colonne les protéines dont tu suspectes la liaison à la séquence considérée. Après élution, tu récupères la protéines liée.   [...] En gros, ta sonde libre va migrer en bas du gel, et en présence d'une interaction avec une protéine, le complexe ADN-protéine sera ralenti dans le gel puisque plus gros. il apparaitra une bande radioactive dite retardée.   [...]

[Biologie Moléculaire] electrophorèse en gel d'agarose

Les plasmides extraits coexistent toujours sous plusieurs formes dans la cellule. l'une linéaire (et oui.) qui migre au plus loin dans le gel, une forme circulaire classique déroulée qui migre le moin loin et, entre les deux, des formes intérmédiaires représentant différents stades de surenroulemement (prenez un fil, raccordez les 2 bouts en rond puis enrouler le) qui occupent un volume plus petit que la forme ciculaire relachée.  [...] Oui mais quand tu extraits les plasmides, tu obtiens toutes les formes à la fois, qui sont strictement identiques au niveau de la séquence. Tu digères aussi toutes les formes et globalement, l'existence de ces formes n'empêche pas les manipulations de biologie moléculaire.  [...]

Aide pour tester l'activité antibactérienne des alcaloides

je suis à la recherche d'un protocole me permettant de faire mes tests soit en milieu gélosé soit à au microplaque de 96 puits.   [...] As-tu fait une petite recherche sur Internet Il s'agit d'un protocole de routine, souvent utilisés dans les TP, donc tu trouvera facilement des explications détaillées.   [...]

Alopécie andro-génétique: traitement à vie???

A ma souvenance, c'est un traitement qui doit être poursuivi à vie pour que les effets perdurent, ce qui le rend c'est vrai très contraignant... Mais vous devriez demander plus de détails au médecin qui vous l'a prescrit, entre autres pour la diminution de la posologie.   [...] Je voudrais avoir des témoignages sur l'utilisation du produit Nanoguard de nanogene. C'est une lotion capillaire anti dht à base d'extraits naturels de plantes.  [...]

Homéopathie uniciste - Page 4

Il se trouve que dans cet élevage où les animaux sont traités exclusivement par homéopathie, le taux de perte est très inférieur à la norme. A quoi donc attribuez -vous ceci Les faits sont là, il n'y a pas eu de proving, mais les effets sont bénéfiques, et pour moi c'est tout ce qui compte.   [...] Autre découverte aussi surprenante. ces bactéries et virus qui émettent des signaux électromagnétiques dans le milieu... alors qu'ils en ont été extraits. Etonnantes, ces découvertes détaillées par la prix Nobel (voir les vidéos), qui lui font dire que l'information génétique peut-être transmise de l'ADN à quelque chose qui est dans l'eau.  [...]

Virus Hpv

Oui, en effet, il existe des traitements naturels pour prévenir le HPV. Personnellement, j'ai eu la chance de rencontrer un naturopathe qui m'a prescrit certains extraits de plantes et une aimentation proscrivant certains aliment (comme le soja et le houblon qui favorisent la production d'oestrogènes) et je suis en régression (voire a priori guérie).  [...] Il faut savoir que (toutes ) les plantes qui ont montré une efficacité se retrouvent purifiées dans des comprimés parfaitement dosés et controlés avec des excipients connus, proposés par des médecins, et pas des laboratoires.  [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Pour les extraits, j'utilise ce protocole sur du foie et sur des cellules, ça revient au même. Il faut faire attention a ne pas mettre trop de tissu dans le tampon, l'idéal étant de peser environ 30mg pour voir ce que ça fait. Grosso modo, une tete d'allumette dans 500µL et tu as de quoi faire des centaines de western.  [...] Ton protocol m'abeaucoup aidé. J'ai extrait mes proteines et fais mon dosage de Bradford. Par contre, jai un soucis, mes proteines sont très concentrées. Du coup, pour avoir les 20µg qu'il faut pour le gel, j'ai des valeurs negatives. Que faire dans ces conditions Estce que je peux diluer mes ech Et si oui, comment pourrais-je les quantifier a la fin.  [...]