• Forum - Rôle, Tampon, Charge

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge pour électrophorèse sur gel d'agarose

Le souci que je rencontre est que personne dans le labo ne sait quelle est la composition exacte du tampon de charge des échantillons pour le gel. (j'ai utilisé un aliquot laissé par la dernière personne ayant fait de la génétique au labo mais qui a depuis quitté les lieux).  [...] Pour le tris, il a pour rôle de tamponner le tampon de charge, et il n'y a qu'un seul tris. On ajoute souvent HCl pour dire qu'on a descendu le pH avec de l'HCl car le tris est basique, donc tris-HCl. Tris-NaOH c'est lorsqu'on a augmenté le pH avec du NaOH pour faire une solution encore plus basique. Pour un tampon de charge, c'est Tris-HCl.  [...]

[Biochimie] Sds page

Pour le tampon de charge, il est plus stable sur de longue période à -20. Pas besoin de filtrer (de toute façon, avec du glycérol dedans, cela ne va pas être facile), et normalement, tu le fais chauffer avec les protéines juste avant le dépôt. Et dans tout les cas, ce composants n'a aucun rôle dans la polymérisation du gel.  [...] J'ai une autre question svp. est ce que je dois arreter forcément le run quand la ligne bleu (du tampon de charge) atteint le front bas des plaques de verre.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Peut-être que tu charges trop de protéines Le fait que le profil de migration du marqueur moléculaire soit OK indique que le pb vient de tes échantillons -. vérifier donc le tampon de charge (il semblait marcher avant) et ton matériel initial...tu resuspends combien de culot de bactérie Essaie avec moins.  [...] As tu essayé de faire un nouveau tampon de chargement le tampon de chargement joue une rôle important dans la migration. Peut être que les petites protéines sont présentes en très faibles quantité ce qui fait qu'on ne les voit pas sur la fin de gel (explication au bol, je précise).  [...]

[Biologie Moléculaire] Bandes d'électrophorèse disparaissant ...

2// Un halo de fluorescence apparait autour des colorants du tampon de charge. On a eu le problème avec le Orange G contenu ds le tampon de Promega, avec la formation d'un halo bleu ciel assez intense qui masquait les bandes. J'ai donc refait un tampon de charge contenant uniquement du bleu de bromophenol, et là pareil, en moins intense.  [...] Qques infos qui vous aideront peut-etre à comprendre. on utilise des réactifs Promega pour faire une PCR, de l'eau ultra-pure pour les mixes, le tampon de migration, le tampon de charge et le gel. Ce sont des gels d'agarose à 1 ou 2%. Tampon de migration = TBE 0,5X.  [...]

[Biochimie] migration sds page

alors voila, je prépare 60 millions de plaquettes (volume de 200-400µl). après traitement je fais une extraction du cytosol total grâce à un kit Active Motif. Ensuite je dénature 5µg de protéines (environ 10µl) par 5µl de tampon de charge (5min à 100°C). je fais ensuite migrer mes échantillons dans un gel 10% pendant environ 2h, grâce à une système Apelex (cuve + générateur).  [...] Je pense que c'est surtout un défaut de migration. En utilisant un b-mercapto neuf pour mon tampon de charge j'ai eu hier une migration nettement plus efficace. Je pense que le problème c'est surtout la quantité de glycérol dans le tampon (merci Vinc) et le fait que les lot de b-mercapto que j'avais utilisés était plus très bon.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tampon de charge (orange G+GelRed)

Pour la préparation du tampon de charge 6X. 40 g de sucrose+ 0,25g d'Orange G dissous dans 100ml de TE.  [...] Pour le mix final. 12,5 ml de GelRed pour 1ml de tampon de charge.  [...]

Sds-page

Je me demande si le SDS à un rôle différent selon sa concentration, ou son utilisation (en tampon ou en gel). Est -il possible qu'en plus de charger négativement les protéines, il les dénature plus ou moins suivant ces critères.  [...] Oui je sais, on peut aussi utiliser du DTT qui est non hépatotoxique et inodore pour les dénaturer. Mais je me demande pourquoi on utilise du SDS dans le tampon ET dans les gels. Ne pourions nous pas mettre du SDS en plus forte concentration dans le tampon et attribuer la charge du gel de concentration et du gel de migration simplement avec des solutions de Lower buffer et Upper buffer sans SDS (Trizma base + Acide chlorhydrique pour ajuster le pH souhaité).  [...]

[Biotechnologie] Tampon de lyse

Ce tampon intervient directement après le lavage des cellules (bactéries ou cellules humaines), et à pour rôle de les détruire. Suivant ce que l'on veut faire ensuite (extraction protéines, ADN et/ou ARN), la composition du tampon varie, mais il contiendra généralement un détergeant afin de briser la membrane cellulaire et d'autre composants, également variables, mais aussi des sels et un pouvoir tampon au pH désirée.  [...] Bref, la composition du tampon de lyse est (très) variable suivant la manip' que l'on réalise, mais son rôle est généralement d'extraire notre produit en détruisant la cellule.  [...]

[Biologie Moléculaire] tampon de charge

j'ai trouvé plusieurs tampon de charge, j'aimerais savoir est ce que le tampon bleu/ orange loading day 6x est bon pour la biologie moléculaire ou il faut mieux d'utilisé un autre tampon de charge.  [...] Le plus critique dans ce genre de tampon de charge, c'est de s'assurer qu'on n'a pas un colorant qui va gêner la visualisation de nos bandes d'intérêt.  [...]

[Biologie Moléculaire] Rôle du saccharose dans un tampon de lyse

[Biologie Moléculaire] Rôle du saccharose dans un tampon de lyse.  [...] j'aimerai connaitre le rôle du saccharose dans un tampon de lyse contenant également du Tris-HCl, de l'EDTA et du Triton.  [...]