• Forum - Rôle, Protéine, Fusion

[Biochimie] Induction

Travaillant sur une induction, je me suis aperçue que j'avait peu de théorie sur cette notion et ses dérivées (comme lacq, opéron, promoteur...).   [...] Qu'est ce que l'IPTG L'opéron Le lacq Quel est le rôle de la protéine de fusion Et la protéine GST.  [...]

[Biologie Cellulaire] Clathrine=endocytose ET exocytose???

sur la vésicule, il y a une protéine qui joue le rôle de signal, qui en se fixant à son récepteur spécifique, permet la fusion de la vésicule avec l'autre vésicule (ou endosome etc.).  [...] L'adressage à l'un ou à l'autre dépend toujours d'une protéine t-snare présente sur la vésicule, qui en se fixant par reconnaissance spécifique à la protéine v-snare correspondante va induire à la fusion des membranes. On trouve les v-snares sur la membrane plasmique, sur la membrane des endosomes etc.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Est-il possible que la protéine de fusion soit utilisée dans l'objectif de découvrir les fonctions de la forme soluble d'une protéine transmembranaire déja connue La protéine de fusion pourrait-elle mimer les fonctions de la protéine soluble initiale.  [...] Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pull down GST

J'ai quelque souci de production de la protéine, j'arrive en avoir mais à des quantités pas très élevée. Sauriez-vous combien il faut de proteine en fusion avec la GST sur les billes pour faire le test pull down.  [...] Personnellement j'utilisais environ 10-15µg de proteine de fusion GST (80kDa au total) couplées aux billes GST pour faire mes test d'intéractions.  [...]

Protéine de fusion recombinante dimérique, besoin d'aide.

- Pour faire une protéine de fusion, est ce qu'il faut mettre le gène codant pour la protéine d'intérêt et celui pour le gène que l'on souhaite fusionner avec celle-ci (par exemple la poly histidine) sur le même plasmide sans les séparer d'un promoteur ou est ce qu'il faut rajouter quelque chose en plus.  [...] Si l'écotine se dimérise, il suffit de faire un seul vecteur avec un gène fusionnant écotine et proinsuline, et la dimérisation de cette protéine de fusion se fera spontanément via le domaine écotine.  [...]

[Biologie Moléculaire] Disparition inexplicable

J'utilise une protéine transgénique qui est en fusion avec le marqueur GFP. Grâce à la fluorescence il m'est possible de suivre l'expression de ma protéine dans le sang des animaux. Mais voilà que la fluorescence a subitement disparue de tous les animaux, alors que la protéine transgénique continue de s'exprimer.  [...] C'est un peu délicat, car on ne dispose pas d'anticorps contre cette protéine dans la communauté. Aussi on utilise un anti-GFP. Le hic c'est qu'en western je vois ma protéine de fusion au poids attendu (poids de la protéine + poids du GFP), mais chez ces souris la fluorescence sanguine était encore présente, donc il n'y a pas de soucis pour elles.  [...]

Antigènes et antibiotiques

Chez les bactéries ont dit que leurs ribosomes ne sont pas antigèniques or se sont la cibles de certain antiobitiques comme le Chloramfénicol. Je ne comprend pas trop comment cela est possible.   [...] Les antibiotiques agissant sur la synthèse protéique bactérienne, ont pour rôle général d'inhiber la fusion des sous-unités ribosomales et de l'ARNm à traduire.  [...]

Phage display et banque d'ADNc

Le principe c'est de faire exprimer la protéine à la surface du bactériophage et puis d'isoler les bactériophages qui expriment la protéine d'intérêt à l'aide d'Ac (et pour réaliser ca, on fait des protéines de fusion).  [...] Dans le phage display, ce qu'on a fait c'est que cet ADNc est fusionné avec l'ADN codant une protéine de surface du virus. De ce fait la protéine codée par cet ADNc va se retrouver exposée à la surface.  [...]

Technique

dans le GST, il faut un tag GST, donc une protéine de fusion. Dans l'IP, pas besoin de protéine de fusion, on peut le faire sur une protéine native, mais il faut un anticorps spécifique.  [...] De la, on peut dire que le GST est universel mais nécessite de faire une protéine de fusion, alors que l'IP on peut la faire en conditions physiologiques, mais il faut un anticorps spécifique qui fonctionne. etc.  [...]

Quel fluorochrome combiner avec rsCherryRev?

J'aimerais faire une protéine fusion avec 2 fluorochromes différents, l'un doit être photoréversible pour une expérience de SMPB répétée et l'un toujours activé, c'est donc une protéine fusion.  [...] Je pensais que pur travailler dans le vivant une protéine de fusion était presque obligatoire mais encore une fois mes connaissances dans ce domaine sont limitées.  [...]