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Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN)

Rôle des composants du Edward Buffer (tampon d'extraction d'ADN).  [...] - NaCl 0,5M. responsable de la plasmolyse des cellules qui libèrent leur contenu qui n'est plus retenu par la paroi pectocellulosique (en sachant qu'on a déjà broyé mécaniquement les fragments) ou pour que le SDS soit soluble dans l'alcool.   [...]

[Biologie Moléculaire] Extraction d'ADN

Je dois trouver le rôle de chacun des composants d'un tampon de lyse précédant l'extraction d'ADN (extraction phénol - chlorophorme) à partir de cellules animales. Quelqu'un pourrait-il me confirmer ou infirmer les rôles supposés.  [...] EDTA - chelateur d'ions bivalents - inhibition de nucléases et dénaturation de structures contenant du calcium.   [...]

[Biotechnologie] Tampon de lyse

Ce tampon intervient directement après le lavage des cellules (bactéries ou cellules humaines), et à pour rôle de les détruire. Suivant ce que l'on veut faire ensuite (extraction protéines, ADN et/ou ARN), la composition du tampon varie, mais il contiendra généralement un détergeant afin de briser la membrane cellulaire et d'autre composants, également variables, mais aussi des sels et un pouvoir tampon au pH désirée.  [...] Bref, la composition du tampon de lyse est (très) variable suivant la manip' que l'on réalise, mais son rôle est généralement d'extraire notre produit en détruisant la cellule.  [...]

La Pcr

extraction d'ADN ca veut dire isoler les molecules d'ADN, c'est a dire le materiel genetique, du reste des composants des cellules.  [...] Et PCR signifie Polymerase Chain Reaction, ou en francais reaction de polymerisation (sous entendu de l'ADN) en chaine. Cette technique permet d'amplifier l'ADN. En faisant court, l'enzyme ADN polymerase catalyse la reproduction a l'identique d'un brin d'ADN au cours d'un cycle de reaction (plusieurs etapes a differentes temperatures), et on fait plusieurs cycles de reaction a la suite (en chaine donc) pour obtenir apres n cycles 2[EXP]n[EXP] fois plus de molecules.  [...]

[Biologie Moléculaire] l'extraction d'ADN

Ethanol. l'ADN est insoluble dans l'éthanol 70% ou 100%, son but sera d'éliminer les contaminants (du genre protéines, lipides...) tout en laissant l'ADN intact.  [...] Tampon de lavage. Souvent composé d'éthanol concentré, il permet de nettoyer l'ADN de ses composants sans le solubiliser.  [...]

[Biochimie] Extraction protéine cry du bacillus thuringiensis

J'ai une présentation à réaliser sur l'extraction de la protéine cry (insecticide) du bacillus thuringiensis. Uniquement l'extraction et non la culture et la purification. Le problème est qu'il existe énormément de méthodes liées à l'extraction de cette protéine, et je m'y perd donc un peu.  [...] La méthode que je choisirais pour une telle isolation serait une destruction physique (Homogénéisateur de type Dounce, presse Aminco- French...) suivie d'une sédimentation pour séparer les composants. Ces méthodes conviennent-elles à mon problème De plus, avez vous une idée du tampon à utiliser pour réaliser cette extraction (SDS ).  [...]

[Microbiologie] Une deuxième stérilisation de milieu de culture?

Le risque est que des compsants thermosensibles du milieu voient leurs propriétés altérées. Ensuite la couleur du milieu peut changer et interférer avec un indicateur de pH après culture et acidification (cas le plus général ) du milieu.   [...] En fait, il s'agissait de milieux sans composants fragiles et destinés à la croissance de mes bactéries. Je devais réhydrater des bactéries lyophilisées et les faire croître dans des volumes de plus en plus importants. Aucune extraction d'ADN n'était prévue et une fois au bon pH, le milieu est assez sélectif.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr-sbt

Et j'ai une autre question dont je n'ai pas la réponse. Qu'est ce qu'un tampon de charge et à quoi servent les différents composants de ce.  [...] - certains contiennent également des composants qui ont la particularité de se lier à l'ADN et d'en augmenter la densité. ainsi ton échantillon reste bien au fond du puits et ne se disperse pas dans le tampon de migration.  [...]

[Biochimie] Sds page

pour le point 2, il faut préparer le tampon (avec tout les composants), avant d'ajuster le pH. Attention au volume nécessaire d'acide (HCl) qui peut être important. Encore une fois, il ne faut pas chauffer (sauf s'il a fait très froid dans le labo et que le SDS à précipité, dans ce cas il faut chaffer à 50-55 degrés jusqu'à dissolution du SDS).  [...] Pour le tampon de charge, il est plus stable sur de longue période à -20. Pas besoin de filtrer (de toute façon, avec du glycérol dedans, cela ne va pas être facile), et normalement, tu le fais chauffer avec les protéines juste avant le dépôt. Et dans tout les cas, ce composants n'a aucun rôle dans la polymérisation du gel.  [...]

[Biologie Moléculaire] ADNc simple, double brins et PCR

En utilisant cet ADNc dans une réaction PCR classique, avec tous les composants de la réaction (tampon, MgCl, dNTP, Taq, 2 oligo spécifiques..) on peut amplifier un fragment double brin.  [...] Autrement dit, dans une réaction PCR classique et à partir d'ADNc simple brin, la Taq synthèsera d'abord le deuxième brin d'ADNc avant d'amplifier le fragment délimité par un couple d'amorces utilisés dans cette réaction Ou bien, une fois qu'on a la Taq, elle prend l'ADN (simple ou double brin) comme matrice pour synthétiser un autre brin et ainsi de suite.  [...]