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[Biologie Moléculaire] Methode sandwich ACTH

Bonjour, Elisa sandwich est une méthode qui permet la détection d'antigènes par des anticorps monoclonaux. tout d'abords il ya fixation d'Ac sur un support solide, puis on ajoute l'échantillon, s'il contient l'antigène, il sera fixé spécifiquement par les Ac, on fait un lavage pour éliminer l'excès, et on ajoute un 2ème Ac spécifique de l'antigène et qui est couplé à une enzyme.  [...] Ainsi, l'antigène s'il est présent, sera fixé entre 2 Ac comme un sandwich, la révélation se fait en ajoutant le substrat de l'enzyme qui va donner un produit coloré.  [...]

[Immunologie] Analyse réponse humorale par ELISA

Pour la révélation, nous avons utilisé un anticorps secondaire couplé à la phophatase alcaline (AP) puis nous avons ajouté le substrat (PNPP) de cette enzyme. Jusque là tout va bien. Ce que je ne comprends pas, c'est pourquoi nous avons dilué le substrat dans du tampon diéthanolamine.  [...] je ne serais pas d'une grande aide mais le seul élément que je peux apporter à ta question c'est que le tampon diéthanolamine a remplacé le tampon glycine/NaOH car il s'est révélé plus efficace. En quoi Je ne sais pas.   [...]

les gels de compression et de sépartion

Les gels sont utilisés pour l'électrophorèse, le wester blot intervient après lors du transfert du produit du gel sur une membrane et révélation par anticorps ou réactions enzymatique. Ne confondez pas les deux.  [...] La différence de pH permet une vitesse de migration différente, une migration plus lente permet l'entrée dans le gel et la concentration des protéines. L'effet est lié au pI de la glycine du tampon de migration.   [...]

[Biochimie] électrophorèse-Gel-Activité?

l'electrophorese ne permet pas de determiner l'activité d'une enzyme (sauf cas particulier ou le substrat est mélangé au gel) elle permet en revanche de s'assurer de la presence de l'enzyme (apres cette derniere peut etre inactive).  [...] le gel qu'on a utilisé ne contient pas le substrat de la béta-gal, mais dans l'étape de la révélation on à utilisé un substrat chromogène qui vas s'associer à la béta-gal,  [...]

[Biochimie] Traitement phosphatase pour démontrer qu'une enzyme est phosphorylée

Je travail actuellement sur l'enzyme LDOX de la vigne. Par western blot nous nous sommes apercu que la réponse était double, deux bandes très proches sont identifiables à la révélation. D'autres résultats nous laissent penser que l'enzyme est phosphorylé dans certaines conditions et nous voudrions donc le démontrer.  [...] Le pb qui ce présente à nous porte sur le choix de la phosphatase à acheter. nous aimerions une phosphatase ayant une efficacité significative sur ce type d'échantillon. Si qqun pourrait nous éclairer sur le type de produit à acheter, chez quel fabricant ou toutes autres remarques constructive seront les bienvenu.  [...]

Lire un test HIV

En effet dans le cas d'une recherche d'antigene, tu utilises un anticorps primaire qui le reconnait, puis tu utilises un anticorps secondaire, qui reconnait ton anticorps primaire. L'anticorps secondaire etant couple a une enzyme qui va reagir avec son substrat et te donner la coloration mesuree par la densite optique.  [...] Les 0.32 peuvent coprrespondre à une légère hydrolyse spontanée du substrat de révélation... dans ce cas pas de problème ce n'est pas en fonction de la quantité d'antigène ou anticorps recherchés.  [...]

Problème de traduction d'une recherche scientifique...

La recherche porte sur l'expression du gène Nia1 chez Arabidopsis et la phrase est celle ci. Nuclear run-on assays demonstrated that Nia1 gene transcription increased dramatically after cytokinin treatment.   [...] Tu isoles l'ARN produit, tu le mets sur un gel avec 7M d'urée pour le dénaturer, puis électrophorèse, puis révélation par autoradiographie.  [...]

[Biologie Cellulaire] substrat de la phosphatase alcaline

merci j'ai finalement trouvé le substrat et effectivement il faut être à un ph alcalin pour que le produit de réaction soit ionisé (ce qui lui donne sa couleur jaune). Mais je voudrais savoir si quelqu'un a essayé le traitement d'une labteck avec ce réactif et s'il est possible de voir ainsi l'activité de la phosphatase.  [...] Je n'ai jamais essayé, par contre j'ai fait l'expérience avec les peroxydases endogènes.. J'ai oublié de les bloquer avant mon marquage et elles ont magnifiquement catalysé le substrat. J'utilisais un kit classique de révélation, ce qui te permets d'etre dans les bonnes conditions de pH.  [...]

[Biologie Cellulaire] Anticorp anti-espece et Western Blot

Dans le western blotting, tu vas effectivement utiliser deux anticorps distincts. L'anticorps dit primaire (que tu as nommé AC1), et l'anticorps qui sera dirigé contre la protéine que tu souhaite mettre en evidence par le western blotting. Cetr anticorps aura été produit par immunisation d'un animal en utilisant la protéine d'intérêt comme antigène.  [...] L'anticorps secondaire (que tu as nommé AC2) est celui qui va te permettre de mettre en évidence la réaction AC1-protéine d'intérêt. cet anticorps (AC2) sera couplé à une molécule qui permettra la révélation (en général l'enzyme HRP, peroxydase de raifort).  [...]

[Biologie Moléculaire] décontamination BET

je voudrais nettoyer au complet la salle de mon labo dans laquelle nous faisions de la révélation sur gel avec du BET. Connaissez-vous un produit pour nettoyer les paillasses et le matériel qui a été en contact avec du BET.  [...] cette discution est un peu ancienne, néanmoins ça peut servir a d'autre, en tant qu'expert il y as les produits spéciaux pour la desinfection par voie aérienne, comme les produit #### supprimé pour pas faire de pub. COMPOSITION. Éthanol (222,4 mg/g), chlorure de didécyldiméthyl*ammonium, phénoxyéthanol, N (3aminopropyl) Ndodécylpropane 1,3 diamine.  [...]