• Forum - Restriction, Séquence, ADN

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

Car par transgenèse, tu insères toi même le gène en question, donc tu connais déjà la fonction en théorie de la protéine qu'il code.   [...] Si on veut la séquence du gène, on le récupère alors en utilisant la même enzyme de restriction qui a permis de constituer les banques d'ADN et on le séquence.  [...]

sépartion des gène de l'ADN

j'ai vu dans un reportage que pour produire cetaine protéine on replacais les gène de l'adn par d'autre pour qu'ils effectuent l'action recherché,  [...] j'ai l'impression que ton repportage a beaucoup simplifié le problème. Mais sache que pour couper l'ADN, on utilise des enzymes (au fait ça prend un Z et un Y ) dites de restriction. Mais il en existe un nombre impressionnant. Chacune est capable de couper l'ADN quand elle rencontre une certaine séquence de bases.  [...]

ADN de séquence inconnue, choix des enzymes de restriction.

Je pense à des procédés comme la I-PCR, ou à l'utilisation de marqueurs radioactifs pour détecter l'emplacement des fameux sites de restriction mais tout cela reste assez vague.s.  [...] La klenow est un fragment de l'ADN Pol I et pour l'autre je pense que je me suis trompé dans l'acronyme. J'ai la flemme de chercher le bon, je voulais parler de la DNA polymérase du bactériophage T4.  [...]

[L1 BIO] TP Biologie moléculaire

Puis après on décide de faire une carte de restriction,en faisant une digestion enzymatique par l'enzyme de restriction xho1,cette enzyme se trouve de base dans le plasmide recombinant et aussi dans la séquence de l'ADN de la GFP mais pas dans celui de la Dsred.  [...] Alors que dans la sequence d'ADN de la GFP on nous dis que le gène se trouve à la paire de base n°421,en ajoutant les paires de bases entre lesquelles mon gène code je trouverais un site de restriction à peu près a 651 paires de bases.  [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

donc apres analyse par electrophorese tu n'aura plus des bout de meme taille que pour un adn normal. se sera donc la preuve qu'il ya eu une mutation tu comprend.  [...] un palindrome (sequence d'adn invariante reconnu par l'enzyme de restriction).  [...]

[Génétique] Principe de la technique RFLP

les cartes de restriction sont indépendantes de l'expression des génes. je ne compris pas cette phrase vue q'on peut connais s'il y avait une mutation d'aprés le RFLP.  [...] Grace a un ordinateur qui pouvait reperer les possibilité d'abolition ou de creation de site de restriction sur une sequence d'ADN qu'on a rentre au prealable on pouvait en quelques sorte triché.  [...]

[Biologie Moléculaire] Protéine de fusion

Pour réaliser une protéine de fusion, la plupart du temps on ligue une séquence de restriction en 3' de l'ADNc codant la protéine N-terminal et la même séquence de restriction en 5' de l'ADNc codant la protéine C-terminale. On choisi une séquence qui une fois clivée génère des bouts collants.  [...] Et le positionnement de ces séquences se fait en accord avec le futur cadre de lecture de chacun des ADNc. Après ligation, on clive avec l'enzyme de restriction et on met les ADNc ensemble et en présence de DNA ligase (la IV je crois..) et avec de l'ATP. C'est un grand raccourci que j'ai pris là, juste pour se faire une idée.  [...]

[Biologie Moléculaire] RFLP: génie génétique et diagnostiques

C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere.  [...] oui,je suis d'accord j'ai bien compris comment fonctionnent les endonucleases de restrictions,mais,ça cloche quand même,si par exemple la partie de sequence qu'on etudie fait par exemple.130 kbp,et qu'elle est digeree en 110 et en 20(si l'individu est sain homozygote) mais reste indissocie(130) pour les homozygotes recessifs.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

Toi tu veux cloner un ARNm. Il te faut déjà le rétrotranscrire en ADNc. Ensuite la première chose que je ferais dans ton cas c'est un 5'-RACE pour conserver la partie 5' de mon ARNm et pouvoir y coller le site de restriction que je veux. Ensuite pour la partie 3', les ARNm ont en commun une queue polyA donc tu peux t'en servir pour designer l'amorce 3' de la PCR permettant d'amplifier la totalité de ton ARNm, et tu colles en 5' de ton amorce 3' un site de restriction différent.  [...] pGL2 est un vecteur un peu plus compliqué. On trouve une f1 ori + polyA coding sequence qui a du vous perturber. Cette construction sert à produire de l'ADN simple brin, si besoin. La polyA cs juste derrière sert à insérer un terminateur histoire d'éviter qu'un promoteur cryptique ne vienne produire des transcrits non désirés (réducteur de bruit de fond).  [...]

séquence kozak

je souhaite faire une transgénèse chez la drosophile, je dispose d'un vecteur possédant le promoteur qui m'intéresse. De plus, j'ai également l'ADNc d'interet avec les séquence 5' et 3' UTR mais je clone directement à l'ATG. Je vais créer un site de restriction avant cet ATG afin de pouvoir le cloner faut il aussi que j'ajoute une séquence Kozak pour avoir une bonne expression de ma prot ou n'est ce pas nécessaire.  [...]