• Forum - Restriction, Promoteur, Plasmide

[Biochimie] pBluescript II KS

Le plasmide KS a le site de restriction pour KpnI proche du promoteur LacZ alors que le plasmide SK a le site pour SacI proche du promoteur.  [...] De souvenir tu dois avoir tous les détails dans le manuel d'instruction.   [...]

[Biologie Moléculaire] Numérotation des sites de restriction

Bonjour à tous j'aimerais savoir comment on numéroté les sites de restriction sur un plasmide. Je dois numéroter les sites de restriction de l'insert d'un plasmide recombinant et je ne sais pas comment faire. Merci d'avance pour la réponse.  [...] Je n'ai pas compris votre réponse. Je vais essayer d'expliciter ma question. En fait j'ai un plasmide psp72 et un insert pst1 et entre le promoteur sp6 et le site de restriction pst1(l'insert) il y'a un écart ce qui est normal. Mais le site de restriction pst 1 porte le numéro 32 et je n'ai pas compris comment le prof a trouvé ça.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problèmes: Recombinaison d'un plasmide

Si il n'y a pas de site de restriction utilisable encadrant ton gène, il va falloir en ajouter. On va donc ajouter 2 sites de restrictions différents de chaque côté de ton gène. Note que pour l'énoncé 1 tu peux utiliser 2 fois la même séquence de restriction car comme tu as déjà ton promoteur le sens d'insertion du gène n'a pas d'importance.  [...] Une fois ta PCR faite, tu digères tes fragments avec les 2 enzymes et pareils avec ton plasmide. Quand tu choisis tes sites il faut que tu vérifies l'ordre dans lequel les sites de restriction sont présents sur le plasmide. Dans notre cas, il faut que EcoR1 soit avant HindIII et le tout après le promoteur déjà présent sur le plasmide (sinon ton insertion se fera à l envers). Donc il faut que ton plasmide ait.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

il faut surtout faire attention qu'il soit spécifique de là ou tu vas faire exprimé ton plasmide, car un promoteur bactérien est différents d'un promoteur eucaryote ou viral.  [...] dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...]

[Biologie Moléculaire] Gène0 AOX1!!

1) Enzyme de restriction spécifique à AOX1 ainsi qu'au plasmide vecteur de clonage. Donc découpage des deux au bon endroit.  [...] 2) Insertion du promoteur dans le plasmide et reapariment de base car notre enzyme de restriction est spécifique et a couper notre fragment au bon endroit.  [...]

[Biologie Moléculaire] Projet de clonage

comme controle de lexpression in vitro (dans 3T3 cellules) il faut construire le suivant. clonez le gfp gen dans le plasmide pcDNA3.1 apres le CMV promoteur. c est un promoteur virale qui est actif dans toutes les cellules eukaryotes. controlez avec les enzymes de restrictions le nouveau plasmide. pcDNA3.1-GFP.  [...] - Enfin on te demande de vérifier ta construction PCDNA3-GFP une fois que tu l'auras obtenue, c'est-à-dire que tu dois trouver une ou plusieurs enzymes de restriction qui te donneront un résultat différent en fonction de si tu as ton insert ou non. Par ex le choix d'une enzyme pour laquelle tu as 1 site dans ton vecteur PCDNA et un site supplémentaire dans ton insert est idéal car tu auras 1 bande = ton vecteur linéarisé si ton vecteur ne contient pas l'insert, et 2 bandes avec des poids moléculaires bien précis si tu as bien ton insert.  [...]

[Biologie Moléculaire] Deux questions d'annales PCEM1

Pour cela, vous devez isoler une région spécifique du long transcrit que vous allez pouvoir insérer en anti sens dans un plasmide afin de produire votre ARN anti sens.  [...] Il vous faut l'insérer en sens inverse par rapport au promoteur, il vous faut donc un plasmide. promoteur-BamH1-Pst1. C'est le plasmide P1.  [...]

Insertion d'un promoteur sur un vecteur plasmidique

Je m'interroge quant à savoir la technique qui pourrait être employée afin d'insérer un promoteur viral afin de permettre l'expression d'un gène de résistance dans une cellule eucaryote. Il est clair que sa présence est indispensable, mais comment l'isoler et l'ajouter (sites de restriction).  [...] Les exercices de premiers et seconds cycles sont parfois bien éloignés de la réalité de la recherche, or ici Vlper se posait une question pratique, se demandait comment on s'y prendrait dans labo de recherche. moi je prend un plasmide qui a le promoteur voulu et je le modifie... point final.  [...]

Comment vérifier orientation d'un insert?

_ si j'insères un gène avec son promoteur dans un plasmide, peut importe l'orientation, il y aura transcription sur les deux brins du plasmide, donc dans les deux cas le gène sera transcrit.  [...] _ si je l'insère à la suite d'un promoteur déjà présent dans le plasmide, là, forcément, je dois le mettre dans le bon sens, ou il se retrouverait sans promoteur pour initier la transcription.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage dans plasmide

Il n'est pas nécessaire d'introduire dans le plasmide les sites de régulations spécifiques au gêne, car le plasmide (sans le gêne d'intérêt)peut déjà contenir divers éléments dont un promoteur et parfois d'autres éléments régulateurs, cela dépend de l'utilité que tu en as.  [...] On me dit qu'un chercheur a isolé une petite quantité d'une certaine enzyme. Il a ensuite obtenu un clone génomique complet du géne codant l'enzyme, puis il le lia à un promoteur bactérien fort sur un plasmide. Une fois le plasmide introduit dans E.coli, il constata qu'aucune enzyme n'était produite.  [...]