• Forum - Restriction, Plasmide, Enzymes

[Biologie Moléculaire] Carte de restriction électrophorèse

J'ai réalisée une digestion d'un plasmide bactérien inconnu afin de déterminer sa carte de restriction. Pour cela, je l'ai digéré avec des enzymes de restriction. BamHI et EcoRI. J'ai fait une digestion avec chacune des enzymes tampon E pour BamHI et tampon MC pour EcoRI et une avec les 2 dans le tampon MC (activité 75% pour bamhI et 100 pour ecorI).  [...] En supposant que dans la double digestion mes 2 enzymes aient coupé au même endroit, je pense pouvoir multiplier 3090 par 2 soit 6180 pb pour la double digestion ce qui serait cohérent avec les autres résultats. Mais je ne comprends toujours par le résultat de cette double digestion, car selon moi j'aurais du obtenir les mêmes résultats que la digestion EcoRI sinon je ne peux pas trouver la carte de restriction de mon plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage avec plasmide

on met les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...] on met (on insert) les différents fragment dans un plasmide, et c'est là que rentre en jeu les enzymes de restriction, donc quand on dit que le plasmide a un site de restriction BamH1 cela veut dire que c'est cette enzyme BamH1 qui va cliver un bout du fragment du gène.  [...]

principe de transformation des levures?

Si c'est ça le principe est pas trop compliqué,tu introduit un plasmide bactérien modifier compartant le géne que tu veux introduir dans ta cellule qui aurra préalablement était rendu perméable grace à un tampon ( enfin je crois que c un tampon. non).  [...] pour ceux qui est du plasmide l'introduction du géne se fait a l'aide d'enzymes de restriction spécifique qui coupe ton plasmide au niveau des séquence souhaiter et tu peux ainsi introduir ton géne.  [...]

[Génétique] Intégration ADNc

je ne comprends pas pourquoi le fait d'utiliser deux enzymes de restriction lorsque l'on veut insérer un ADNc dans un plasmide permet de contrôler le sens d'intégration de cet ADNc.  [...] Même si tu peux aussi couper ton plasmide avec une ou 2 autres enzymes qui génèrent des extremités cohésives compatibles avec celles de ton insert. C'est-à-dire que tu peux avoir un site de restriction reconnu par une enzyme différente mais une fois la coupure faite, l'extremité genérée est compatible avec celle de ton enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Promoteurs, gènes et plasmides

dc bien que jai une petite etape de selection dans des cellules bacteriennes (liee au fait que mon plasmide a une resistance AB), mon promoteur doit etre eucaryote.  [...] J' integre dans les bact mon plasmide dans lequel j'aurais au prealable insere mon gene X (grace aux enzymes de restriction).  [...]

Clonage orienté

Après PCR, il faut digérer l'insert d'une part, et le plasmide d'autre part. Ces digestions vont permettent de générer des bouts cohésifs entre l'insert et le plasmide. Il suffit alors de choisir deux enzymes de restriction (peu importe lesquelles a priori).  [...] Il faut donc que je choisisse des enzymes présentes à la fois au niveau de la séquence T7 et SP6.  [...]

plasmide -digestion par enzymes de restriction

Je suis désolée mais je comprends pas ce que je dois faire... J'ai bien compris que si on coupe un plasmide circulaire via une enzyme de restriction il devient linéaire mais les extrémités c'est quoi.  [...] Effectivement, le nombre de N équivaut à ce qu'il y a de part et d'autres des sites de restriction. Tu peux donc déterminer le nombre si tu connais la taille du plasmide. Mais possèdes-tu ces informations.  [...]

[Microbiologie] Analyse plasmidique

Je ne comprends pas comment conclure, lorsqu'on obtient plusieurs fragments de taille différentes à l'électrophorèse, qu'il s'agit bien de fragments différents et non du même fragment dans une configuration différente (forme linéaire, surenroulée..).   [...] Lorsqu'on observe des fragments de plasmide sur gel, cela veut dire la plupart du temps qu'on l'a clivé avec des enzymes de restriction. Il n'y a que la forme circulaire du plasmide qui peut être sous forme surenroulée, mais les formes linéaires le restent.  [...]

[Biologie Moléculaire] Enzymes de restriction sur plasmides- Digestion complète et incomplète

dites moi svp comment peut on trouver le nombre de fragments d'ADN produits lors d'une double digestion du plasmide pCR-gai par les enzymes de restriction HindIII et EcoRI et leurs tailles respectives.  [...] sachant que pCR-gai est un plasmide d'environ 5500 pb qui contient la séquence codante du gene GAI (1579 pb), et le nombre de sites de restriction de HindIII est 2 et EcoRI est 2 par molécule.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide et enzymes de restriction

Pour un TP de biologie moléculaire je dois couper un plasmide avec deux enzymes de restriction différentes, je voulais savoir comment (si c'est possible) empêcher le fragment découpé de se recoller à mon plasmide et ensuite comment récupérer mon vecteur ouvert (mes cours ne sont pas clairs du tout).  [...] Et aussi, comment je peux faire pour récupérer mon plasmide après la digestion Je ne comprends pas si je dois passer par une électrophorèse ou une colonne de silice ou aucun des deux.  [...]