• Forum - Restriction, Enzyme, Séquence, ADN

[Biologie Moléculaire] carte de restriction?

C'est la position des sites de restriction d'une enzyme sur la séquence d'ADN digéré.  [...] Sara789, aurais-tu oublié les règles basiques de politesse.   [...]

OGM (l'identification du/des gènes intéressant(s))

Si on veut la séquence du gène, on le récupère alors en utilisant la même enzyme de restriction qui a permis de constituer les banques d'ADN et on le séquence.  [...] Pour remonter au gène d'interet, ne serait il pas possible de partir de la protéine, recreer une sequence ARNm en lisant le code génétique à l'envers, et de se servir de cette séquence comme d'une sonde (si on la rend par exemple détéctable par radioA) et d'hybrider cette dernière dans le génome de l'individu que l'on étudie.  [...]

[Génétique] Notion d'insert et de vecteur

Donc voila on me parle d'enzyme de restriction coupant l'adn celon des sequences, de vecteur, et d'un insert qui correspondrait a une sequence de nucleotide en rapport avec la coupure enzymatique... et je ne comprend pas vraiment cette histoire de insert.  [...] En générant les même extrémités au niveau de l'insert, celui ci pourra s'apparier avec les extrémités du vecteur car si tu remarques ce sont des séquences dites palindromiques. la moitié 5' de la séquence est complémentaire de la moitié 3'. Une fois collé, on reconstitue un fragment d'ADN circulaire avec l'insert inséré.  [...]

Les empreintes génétiques !

Coucou, je suis pas super calé la dessus, mais je sais qu'il faut utiliser des enzymes de restrictions pour couper les séquences d'ADN spécifiques voulues, puis de chauffer pour séparer les 2 brins, avant de faire une électrophorèse sur gel d'agarose en oubliant pas d'ajouter un agent intercalant comme le BET.  [...] 3) On utilise une enzyme de restriction qui a la propriété de couper les brins d'ADN quand elle rencontre une séquence spécifique. Comme les régions ciblées sont variables selon les individus, la localisation des séquences à couper est différente d'un individu à l'autre.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Je ne comprend pas bien ta question. Pour construire un plasmide recombiannt tu as besoin de ta séquence d'intêret c'est à dire celle que tu veux intégrer dans le plasmide. Tu l'obtiens en l'amplifiant par PCR ou en digerant directement ton ADN par une enzyme de restriction.  [...] Ton fragement d'intêret peut possèder plusieurs sites de restriction spécifiques à l'enzyme utilisée. on obtient alors plusieurs fragments d'ADN dont un seul comprend le gène d'intéret. L'ADN plasmidique ne doit contenir qu'un seul site de restriction spécifique, au sein d'un gène de sélection.  [...]

[Génétique] Question qui me tracasse beaucoup ( information génétique )

Il faudra bien choisir les enzymes de restrictions selon le plasmide mais également leurs séquences (par rapport à notre gène) car on va l'insérer grâce à la complémentarité des bases.  [...] Il n'y a pas d'incohérence puisque le gène recombinant est obtenu grâce à la même enzyme de restriction que celle qui sert à ouvrir le plasmide. La séquence ADN d'intérêt s'insère donc dans celle du plasmide par complémentarité de ses extrémités avec celles du plasmide.  [...]

[Génétique] Choix amorces amplification portion ADN

5' CG CTCGAG CTT AGG GTG CCA TTT AAC 3'-. amorce avec 2 nucleotides au hasard, mon enzyme de restriction, et 18 nucléotides pour donner 26.  [...] - l'enzyme de restriction reconnait une séquence (souvent palindrome ) de l'ADN, s'y fixe, mais sous quelle forme est cette enzyme ( est-ce qu elle doit etre complémentaire du brin d'ADN, ou peut importe sa forme, elle reconnait le site, s'y fixe et ne doit pas s'apparier à l'ADN).  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...] L'enzyme de restriction SapI coupe la séquence d'ADN SapI et une protéase (dont j'ai oublié le nom) coupe cette même séquence une fois traduite.  [...]

Enzyme de restriction: petite difficulté avec sa définition

une enzyme de restriction reconnait un site (=une séquence) spécifique sur l'ADN et coupe de chaque coté de ce site. Si le site est à l'extrémité d'un brin d'ADN linéaire, alors elle peut couper.  [...] Ces séquences correspondent à ce qu'on appelle une séquence palindromique (qui se lit de manière identique dans les 2 sens). Cela veut dire que dans un grand flot de bases azotées allant de quelques bases à plusieurs centaines ou plusieurs milliers, dès que l'enzyme trouvera cette séquence enfouis dans le code génétique, elle la coupera de manière cohésive, c'est à dire en scindant le double brin en partant d'en haut à gauche entre le G et le A du 5'-3', fait sauter les liaisons entre les AATT complémentaires des 2 brins et finalement coupe encore entre le A et le G du 3'-5'.  [...]

[Biotechnologie] Enzyme de restriction

donc apres analyse par electrophorese tu n'aura plus des bout de meme taille que pour un adn normal. se sera donc la preuve qu'il ya eu une mutation tu comprend.  [...] un palindrome (sequence d'adn invariante reconnu par l'enzyme de restriction).  [...]