• Forum - Restriction, Coupe, Séquence, ADN

[Biologie Moléculaire] marqueurs moleculaires

De l'ADN est coupé en fragments par une enzyme de restriction, cette dernière coupant l'ADN au niveau d'une séquence qui lui est spécifique (site de restriction). Les fragments d'ADN ainsi obtenus, nommés fragments de restriction, sont ensuite séparés selon leur longueur par électrophorèse sur gel d'agarose, on obtient un profil.  [...] Ce profil varie selon les individus ce qui traduit bien un polymorphisme. Ces différences entre profils sont causées par des variations dans les séquences de nucléotides, ce qui va créer ou faire disparaître des sites de restriction.  [...]

[Biologie Moléculaire] Choisir le bon vecteur?

1- ma sequence d'adn doit etre coupe des 2 bords par la meme enzyme. Or je retrouve pas le meme site de restriction 2 fois dans ma sequence.  [...] J'ai moi aussi de la difficulté a trouver un vecteur approprié, Et Je ne comprend pas pourquoi le bon vecteur dans cet exemple serait PinPoint xa-1 Selon ce que j'ai vu il ne possede pas de sites de restriction communs avec la sequence d'ADNc dans sa region du gene de resistance Je ne comprend pas d'ailleurs pk le site de restriction doit se trouver dans la sequence de resistance a l'antibiotique et non ailleurs dans le plasmide.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

Pas necessairement, souvent n'importe quelle enzyme de restriction coupera n'importe quel ADN genomique. Cependant il y a certaines limites. Par exemples.  [...] heu... ben southern blot c'est le nom de la methode. Le principe de la methode est d'hybrider une sequence d'ADN connue sur un pannel de sequence d'ADN inconnues (banque d'ADN, ADNg coupé par des enzymes de restriction, etc...) pour mettre en evidence la presence ou l'absence de la sequence connue.  [...]

[Génétique] Dm sur la myopathie de Duchenne

Pour la question 2. tu dois d'abord savoir ce qu'est une enzyme de restriction (une enzyme qui coupe l'ADN, en reconnaissant une séquence particulière de désoxynucléotides). Les 2 allèles, sain et muté, ont-ils exactement la même séquence.  [...] Imagine que ton enzyme reconnaissent la séquence. ATTGTT, que l'on trouve dans un allèle 1. Si l'allèle 2 est muté et possède à la place ATTCTT, l'enzyme ne coupera pas à cet endroit, alors l'enzyme permettra d'obtenir des fragments d'ADN de taille différente selon que l'allèle possédé par l'individu.  [...]

[Biologie Moléculaire] Technique GST-Pull Down

c'est ça. Le truc c'est qu'il n'existe pas toujours d'anticorps dirigés contre les protéines d'intérêt ou d'anticorps bien spécifiques alors que ceux qui reconnaissent la GST le sont. Il existe aussi des techniques pour récupérer la protéine sans le tag à la fin, par exemple en clonant un site de restriction SapI entre le cDNA de la prot et celui de la GST.  [...] L'enzyme de restriction SapI coupe la séquence d'ADN SapI et une protéase (dont j'ai oublié le nom) coupe cette même séquence une fois traduite.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Voilà, je n'ai pas compris la correction d'un TD à propos de la PCR. Par le fait que l'on utilise des amorces oligonucléotidiques de synthèse, il est possible d'ajouter des séquences dans la région 5' de chaque amorce. Par exemple, un site de restriction aux 2 extrémités du fragment d'ADN synthétisé permettrons ultérieurement d'assembler le produit PCR dans un plasmide.  [...] Je ne comprend pas vraiment...une sonde est complémentaire et antiparallèle de la séquence à étudier donc comment rajouter une séquence à l'extrémité 5' Celle-ci ne s'hybride pas Et puis une enzyme de restriction ne coupe que sur un ADN double brin donc je ne vois vraiment pas comment tout cel s'organise.  [...]

[Biologie Moléculaire] Clonage par PCR taille des amorces

Une question simple. j'aimerais cloner un gène dans un vecteur pENTR. J'ai la séquence codante de ce gène dans un autre plasmide, je compte donc l'amplifier par PCR en rajoutant des sites de restrictions en 5' et 3' qui me permettront ensuite de le mettre facilement dans mon pENTR d'intérêt.  [...] En général les oligos font 20-30pb et on essaye d'avoir un ratio équilibré entre les G+C et les A+T (dans ces conditions, une PCR aux température d'hybdridation classiques 51-58°C doit fonctionner). La restriction coupe ton ADN proprement, pas besoin d'ajouter des bases pour protéger ta séquence codante.  [...]

Enzyme de restriction: petite difficulté avec sa définition

D'après mon cour, une exonucléase détache des nucléotides terminaux, une endonucléase coupe les liaisons à l'intérieur de la chaine. Toujours d'après mon cour, une enzyme de restriction est une endonucléase... C'est ce que je ne comprends pas. cette enzyme de restriction semble couper la séquence de nucléotides aux extrémités, comme le fait une exonucléase.  [...] une enzyme de restriction reconnait un site (=une séquence) spécifique sur l'ADN et coupe de chaque coté de ce site. Si le site est à l'extrémité d'un brin d'ADN linéaire, alors elle peut couper.  [...]

[Biologie Moléculaire] La génomique structurale !

Après, on passe à la carte physique qu'elle consiste d'abord à détérminer également la distance entre les locus en paire de base et puis à cloner tous le génome sous formes de séquence chevauchants par utilisations d'enzymes de restriction... Mais pk cloner tous le génome tandis que, ce que nous intéresse c'est qu'un seul gène.  [...] Ils ont donc coupé, puis cloné chaque fragments de l'ADN humain (en usant à la fois d'enzyme de restriction et de séquences chevauchantes) dans des vecteurs d'expression standardisé, qu'ils ont fait séquencé (si je me souviens bien, à l'époque, il fallait faire une 20 de run -pas sur du chiffre, si quelqu'un peut confirmer- pour être un peu près sûr du séquençage des 500 premières paires de bases).  [...]

activité endonucléasique

Bonjour, qu'est ce qu'un complexe enzymatique avec activité endonucléasique merci de m'éclaircir.   [...] quel type de complexe. Une endonucléase est un enzyme qui coupe les acides nucléiques (ADN ou ARN) au sein même de la molécule (alors que les exo c'est à partir des extrémités). Tu as notamment des endonucléases de restriction qui elles reconnaissent des séquences spécifiques.  [...]