• Forum - Restriction, ADN, Produit

[Biologie Moléculaire] enzymes de restriction

Lorsqu'une enzyme de restriction a efficacement digéré un ADN, cet ADN est coupé en un ou plusieurs sites. Comment vérifier qu'un ADN est coupé Cette technique fonctionne-t-elle quelque soit mon type d'ADN (génomique, plasmidique, produit de PCR, etc.).  [...] Ceci dit, cela ne fonctionne pas dans tous les cas, par exemple si la taille de la molécule après digestion est très proche de celle avant digestion (cas des sites de restrictions aux extrémités d'un produit de PCR).  [...]

électrophorèse sur gel d'agarose

J'ai eu un TP de biotechnologie où on a fait une électrophorèse sur gel d'un plasmide purifié non digéré et d'un plasmide purifié dirigé par deux enzymes de restriction.  [...] Ta première enzyme ouvre le plasmide en coupant à un premier endroit. La seconde coupe à un autre site, et produit 2 morceaux de tailles différentes. d'où les 2 bandes.  [...]

[Biochimie] Clonage après purification sur gel

L'amplification par PCR va donner des amplicons non méthylés (et aussi ne contenant plus ta cassette vu que l'amplification du vecteur exclura la cassette). Tu ajoutes à ton produit de PCR l'enzyme DpnI qui va cliver l'ADN méthylé en fragments de quelques centaines de bases (enzyme de restriction reconnaissant un site de 4 bases méthylé).  [...] Ainsi, seul ton vecteur d'origine (celui contenant ta cassette) sera digéré par cette enzyme, et pas ton produit de PCR, ce qui te permet de bien te débarrasser de ta cassette.Cela pourrait être une stratégie de rechange par rapport à ta stratégie actuelle qui est de simplement extraire la cassette avec des enzymes de restriction correspondant à ton futur site d'insertion.  [...]

[Biologie Cellulaire] enzyme de restriction

On prélève l'insert (le gène à cloner) grace a une enzyme de restriction qui va cliver l'ADN sur des sites de restriction spécifique (c'est une séquence palindromique). On peut ensuite amplifier l'insert par PCR. puis l'insérer dans le polylinker avec une ligase.  [...] c'est a peut pres ca, sauf que si tu fais une etape de PCR c'est le produit de PCR que tu digeres directement, pas le plasmide. Tu ne peux pas cloner un gène par restriction directement a partir de l'ADN genomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Pcr

Voilà, je n'ai pas compris la correction d'un TD à propos de la PCR. Par le fait que l'on utilise des amorces oligonucléotidiques de synthèse, il est possible d'ajouter des séquences dans la région 5' de chaque amorce. Par exemple, un site de restriction aux 2 extrémités du fragment d'ADN synthétisé permettrons ultérieurement d'assembler le produit PCR dans un plasmide.  [...] Au cycle suivant, l'amorce (antisens cette fois) va s'hybrider sur ce nouveau brin, complémentaire et antiparallèle du brin matrice. L'élongation permettra de produire un brin complémentaire a ce nouveau brin, jusqu'a son extrêmité 3' qui contient le site de restriction.  [...]

[Génétique] Thérapie génique: synthétiser le gène correcteur

En bref l'enzyme de restriction va permettre le clivage de l'ADN par rapport au site de restriction. Ensuite les fragments d'ADN sont séparés (ou différenciés) par électrophorèse.  [...] Et ensuite il y a l'étape de l'insertion du fragment d'ADN, clivé par l'enzyme de restriction qui sera inséré dans un plasmide ou un vecteur.  [...]

Un particulier peut il se procurer du materiel de laboratoire ?

... Les produits de laboratoires sur le marchés ne sont accessibles que pour les entreprises ou un particulier peut s'en procurer.  [...] Tu es là sur le forum de bricolage et décoration, mais tu ne précises pas le domaine des expériences que tu projettes d'entreprendre. Cela concerne probablement des instruments ou des outils mais aussi des produits.  [...]

microbiologie (sens anti-sens)

.) qui va coupé a des site bien précis, on aura plusieurs fragment d'ADN, on met les fragment dans un gel d'agarose par exemple et on laisse les fragment migré(cartographie de restriction)===. au final au aura la taille (base) de chaque fragment.  [...] on a deux plasmide, on va transplanter pour chacun un fragment d'ADN, on partique l'experience avec des Enzyme de restriction et ensuite on place les fragment dans un gel et on laisse migré(cartographie de restriction).  [...]

Enzymes de restriction

La méthylation de certaines bases, chez les bactéries, permet, si j'ai bien compris, d'éviter à l'ADN d'être découpé. Et donc pour éviter que son ADN soit découpé, la bactérie méthyle les bases qui correspondent à son (ses) enzymes de restriction... C'est cela.  [...] Ici on parle un peu du même système qu'avant, mais au niveau du phage. Lorqu'un phage infecte une bactérie, il veut éviter qu'un autre phage infecte cette meme bactérie (coinfection) pour cela il utilise le système de restriction/modification. Ainsi l'ADN du deuxième phage entré sera clivé s'il n'a pas les bonnes modifications.  [...]

Dénaturation de l'adn en pH acides

D'ailleurs en parlant de dénaturation de l'ADN, on parle souvent de digestion par des enzymes de restriction de l'ADN avant des techniques de séquençages comme des Southern blot etc.  [...] En milieu alcalin l'ADN sera dénaturé, donc il passera de bicaténaire (double brin) à monocaténaire (simple brin) (les ponts H entre les bases des 2 brins seront détruits) -. action réversible.  [...]