• Forum - Restriction, ADN, Fréquence, Coupure

[Biologie Moléculaire] Aflp

-restriction de l'ADN génomique par une ER à fréquence de coupure élevée et une ER à fréquence de coupure faible.  [...] ma question est.comment on peut faire une amplification selective des fragments de restrictionj'ai lue que la selection est faite parapport à une base mais jai pas bien compris.  [...]

Besoin que l'on eclaire ma lanterne en Génetique

Je connais moins bien l'AFLP, mais il me semble que c'est la technique utilisée pour les empreintes ADN humaines (par exemple en criminologie). Elle se base sur la restriction du génome, c'est à dire coupure par des enzymes de restriction. On utilise des enzymes ayant un site de restriction assez rare.  [...] Ensuite les aux extrémités des fragments d'ADN obtenus on fixe des séquences cibles. Il ne reste plus qu'à faire une PCR en utilisant des amorces complémentaires des séquences cible.  [...]

[Génétique] Notion d'insert et de vecteur

Donc voila on me parle d'enzyme de restriction coupant l'adn celon des sequences, de vecteur, et d'un insert qui correspondrait a une sequence de nucleotide en rapport avec la coupure enzymatique... et je ne comprend pas vraiment cette histoire de insert.  [...] Sinon brève explication. Un vecteur est souvent un fragment d'ADN circulaire, tel que le plasmide. L'insert est un fragment linéaire que tu veux insérer dans le vecteur. Pour cela il te faut ouvrir le vecteur. On prend une enzyme de restriction car elle coupe en laissant de part et d'autre de la coupure des bouts collants car une partie de ces bouts est simple brin et peut donc s'apparier avec un autre fragment simple brin de séquence complémentaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Site de restriction

Une coupure de l'ADN peut être engendré soit mécaniquement ou par des agents chimiques mais dans ce cas là on coupera l'ADN de façon aléatoire on ne pourra pas prédire l'endroit où ça va se casser tandis qu'avec une enzyme de restriction on coupe l'ADN à l'endroit où sera son site de restriction.  [...] Selon moi, la chose relève plutôt de l'endroit où se produit la coupure, pas des agents. Surtout, je ne vois pas comment un site de restriction sera présent sans que le site de coupure y soit (mutation ponctuelle exclue).  [...]

[Divers] la biologie générale

-transcription utilise toujours les 2 brins du gêne comme matrice, ce qui permet la production de 2 molécules de l'ARN messager différent.   [...] Parmi les séquences suivantes,qui appartient à une molécule d'ADN bicaténaire, laquelle peut etre reconnue comme le site de coupure d'une certaine enzyme de restriction*.  [...]

[Biologie Moléculaire] utilisation de serial cloner

Alors j'explique mon problème, je dois faire un clonage avec des sticky ends et quand j'essaye de faire une construction avec serial cloner je n'arrive pas à sélectionner une enzyme pour qu'il coupe lui même au niveau du site de restriction. Est-ce tout simplement possible Si non comment faites vous.  [...] J'ai aussi une autre question, toujours sur Serial Cloner, est-il possible de couper par une enzyme de restriction et avoir la séquence correspondante à l'ADN linéaire après la coupure.  [...]

La PCR fragments d’adn

Tu concentres, et tu fais ta PCR. Il peut être bon de couper l'ADN préalablement par une enzyme de restriction pour avoir des fragments plus courts avant la PCR.  [...] Vous avez bien compris la chronologie des événements. PCR puis électrophorèse. Mais vous ne mentionnez pas les enzymes de restriction alors que c'est le plus important, c'est cette coupure par les enzymes de restriction de l'ADN non codant précédemment amplifié en PCR qui va permettre de donner des profils différents, qui seront ensuite révélés sur le gel après électrophorèse.  [...]

[Biologie Moléculaire] logiciel clonage

Je ne comprends pas votre question. Vous avez votre séquence, vous connaissez vos sites de restriction d'intérêt. Quel est le besoin d'un logiciel.  [...] En effet, certains appellent cela le clamp et il permet d' internaliser le site de restriction. En effet, les enzymes de restrictions sont des endonucléases si bien que leur site de coupure doit être à l'intérieur d'une séquence ADN, et non en bordure.  [...]

[Génétique] SMEAR qui es tu??

sin0n j'ai une autre question concernant la technique d'hybridation est qu'il faut tjs utiliser une sonde pour trouver le fragment que l'on cherche.   [...] En biologie moléculaire, le terme smear désigne la multitude de bandes observées sur gel d'agarose lorsque par exemple ton ARN est très dégradé, un ADN génomique a été digéré par une enzyme à forte fréquence de coupure, que ta PCR est vraiment très foireuse, etc.  [...]

extraire de l'ADN

Pour le reste, certaine enzyme de restriction sont effectivement incapable de couper l'ADN si celle-ci es méthylée au niveau du site de coupure (à l'inverse il existe des enzyme qui cliveny spécifiquement ces sites).  [...] La méthylation (dans le cadre de la protection contre des enzymes de restriction) est effectué par des méthyltransférases qui vont reconnaître un site de coupure d'une enzyme de restriction et vont ajouter un groupement méthyle au niveau de ce site (souvent au niveau d'une cytosine).  [...]