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[Biochimie] exercice de chromatographie pour un peptide

PH=3.25. PHi(D) = 3.0 et PHi(E) = 3.20.Et sachant que les différents AA se détachent de la résine d'autant meiux queleur charge est négative (= plus les AA st chargés négativement, plus ils se détachent...).  [...] On part avec un tampon acide (pH=1-2). On a alors tous les aa chargés +. Ils sont donc liés à la phase stationnaire. A mesure que l'on augmente le pH, les aa vont se deprotonner. Lorsque l'aa sera neutre electriquement, il n'interagira plus avec la résine et sera élué.  [...]

Dosage de sucres pas HPLC

Je ne comprend pas comment on peu fixer des polyols, ici l'isomalt et le mannitol sur résine échangeuse de cation. Ces sucres peuvent ils être chargés positivement.  [...] En fait c'est une phase statio négative, on y met des groupement positifs doublement chargés, ainsi ils gardent une charge libre positive. Du coup ça s'appelle plutôt une chromato ionique. Et justement, j'ai vu qu'elle était utilisée beaucoup pour séparer les oligosaccharides, car à pH basique, les polyols sont chargés négativement.  [...]

[Biotechnologie] [sels] dans un tampon

Bonjour tout le monde, je possede dans une manip un tampon de lavage pour une chromato d'affinité sur du cobalt, et je saisis pas la forte concentration en sels (1000mM).   [...] En chromato d'affinite au metal comme cobalt ou nickel avec TAG histidine, le sel n'influe pas sur la fixation TAG. -. resine, en revanche cela permet de limiter les fixations non specifiques de tes proteines (dues au charges).  [...]

chromatographie échangeuse d'ions

la chromatographie échangieuse de cation est une résine chargée nagativement donc elle fixe les molécules chargés positivement.  [...] C'est, en gros, la moyenne des pK. Ainsi chaque acide aminé va prendre une charge nullle au dela du pK de sa fonction amine. Dans ce cas il sort de la résine. En augmentant graduellement le pH, on peut ains sortir successivement chaque protéine.  [...]

Probleme acides aminés

Bonjour voici mon probleme. je ne comprends pas trés bien le role des charges des acides aminés dans un probleme. Au sommet d'une colonne remplie d'une resine cationique, on place un melange des 3 acides aminés suivants. alanine, arginine et acide glutamique.  [...] la résine cationique est une résine chargée négativement, donc elle attire les ions positives, autrement dit il y a répulsion avec l'acide glutamique donc élué en premier. le role de l'élution en pH, est simplement de permettre l'élution de différentes protéines selon la charge (donc selon le pH...la réonse est dans ta question).  [...]

[Biochimie] Méthodes de purification du lysozyme

Si tu disposes d'anticorps spécifiques (ce qui est le cas pour le lysosyme je suppose), tu peux faire une chromatographie d'immunoaffinité (les groupements chargés négativement de ta résine sont remplacés par des anticorps spécifiques de ta protéine). tu peux trouver des protocoles sur internet, en utilisant ce terme ou bien immunocapture.  [...] Les deux inconvénients majeurs sont que les conditions d'élution de ta protéines peuvent la dégrader, et surtout que ça coûte très cher comparé à la colonne échangeuse d'ions. Je n'ai malheureusement pas de chiffres à donner sur l'enrichissement et le rendement de ce genre de méthodes.   [...]

[Biologie Moléculaire] Aide pour devoir sur chromatographie

Vous faites une filtration C'est l'adsorption sur la résine C'est une résine échangeuse d'anion ou de cation (pk ça change tout).  [...] Merci de ta réponse. La résine IRC amberlite 50 est une résine carboxylique cationique faible. Le problème c'est que nous sommes que en 1ère et j'ai l'impression que c'est un TP de terminal voir de BTS.  [...]

[Immunologie] Immunoprecpitation: liaison de la resine protG avec l'anticorps qui marche pas

Bonjour tous le monde. Je suis entrain de faire la mise au point d'une IP. pour se faire j'ai voulu juste tester le rendement de la résine protG avec l'anticorps sans rajouter la protéine d'intérêt. la résine ne capte même pas le 1/10 de la quantité de l'anticorps de départ qui est de 1µg dans 500µl de PBS avec 50µl de la résine.  [...] C'est peut-être à cause des charges Avez-vous essayé de laver au tampon Tris-EDTA ou phosphate sans NaCl Quelle résine utilisez-vous.  [...]

Séparation par chromatographie sur résine échangeuse de cation

Voilà, j'ai un exo à faire, mais le problème est que je n'arrive pas à trouver un site qui puisse m'aider. On me demande d'indiquer et justifier l'ordre d'élution de trois acides aminés lorsque le tampon varie de 3 à 10. Est ce que je me trompe en pensant qu'il y a un rapport entre le pH du milieu et le pHi des AA.   [...] Non, tu n'as pas tort, regarde la charge des AA à chaque pH de tampon. d'un autre coté, 'as la charge de la résine et donc (même chage que la résine=répulsion de l'AA=élué en premier), charge opposée=élué en dernier.  [...]

Chromatographie échageuse d'ions

Il est indiqué que le pH est trés basique, par conséquent les acides aminés chargées (Lysine et arginine) seront sous forme déprotonée et puisqu'ils contiennent respectivement une fonction amine et guanidine, on obtiendra NH2. Or dans la correction il est noté que ce peptide est retenu par une résine échangeuse d'anions.  [...] Et ne suis pas sûre d'avoir compris le principe. un peptide chargé positivement est bien retenu par une résine anionique ou par une colonne échangeuse de cations.  [...]