• Forum - Réplication, Plasmide, Cellules

Carte plasmide pcDNA 3.1

Je sais que les ori servent à initier la réplication, mais je croyais qu'un plasmide se répliquait d'un seul coup et toujours à partir du même endroit, donc pourquoi il y a 3 ori différentes (SV40ori, pUCori, f1ori) Et SV40pA qu'est ce que c'est.  [...] SV40ori sert d'origine de réplication dans certaines cellules eucaryotes, c'est-à-dire que si on l'insert dans E.coli il ne va pas s'exprimer Mais si le plasmide doit se répliquer dans une bactérie la réplication va commencer à pUCori ou f1ori Je ne comprends pas pourquoi il y a plusieurs origines.  [...]

[Biologie Moléculaire] Utilisation AAV pour CRISPR/Cas9

NGG suivi en 3' du transactivating crRNA se liant à la nucléase Cas9 (tracrRNA). (iii) introduire ce matériel génétique dans un plasmide. (iv) transfecter ce plasmide dans des cellules en culture permettant la réplication des virus adéno-associés défectifs (293AAV Cell Line).  [...] (v) infecter ces cellules par ces AAVs défectifs. (vi) recueillir les virus adéno-associés défectifs recombinants produits dans le milieu extracellulaire.  [...]

[Biologie Moléculaire] Décision de replication de l'ADN

La façon générale n'existe pas vraiment dans le sens où les systèmes de réplication (et d'initiation de la réplication) sont différents selon qu'il s'agit de cellules eucaryotes ou procaryotes.  [...] Il y a deux cas possibles. soit le plasmide contient une origine de réplication reconnue par la machinerie de la Levure et dans ce cas on aura une prolifération des cellules l'ayant, soit le plasmide n'en contient pas et les cellules ne survivront pas.  [...]

[Biologie Moléculaire] Plasmide

la transfection de cellules eucaryotes est possible. Par lipofection, éléctro, microbalistique etc...Par contre contrairement au bactérie va se poser le problème de réplication. Car le plasmide n'est pas au réplicome dans les cellules eucaryotes supérieur.  [...] Cet antigène permet au plasmide d'être répliqué par la cellule, et donc d'être conservé pendant une période plus longue. Sauf exception, la présence de cet antigène est absolument nécessaire dans les cellules de mammifères pour qu'il y ait réplication d'un plasmide.  [...]

[Biologie Moléculaire] Question purification QIAprep

Si tu ajoutes du Cm ici c'est pour augmenter le nombre de copie du plasmide. J'imagine que tu dois l'ajouter quand tes cellules sont a DO 0.6-1.0 En fait le Cm va inhiber la traduction, du coup les cellules vont arreter de pousser, mais la replication de l'ADN va continuer.  [...] En fait le Cm va inhiber la traduction, du coup les cellules vont arreter de pousser, mais la replication de l'ADN va continuer. Ta DO va donc etre stable, mais la quantite d'ADN et donc de plasmide va augmenter. Du coup tu vas recuperer plus de plasmide tout en utilisant un kit pour une miniprep.  [...]

origine de réplication

Bonjour à tous, lorsqu'on modifie génétiquement une cellule en lui injectant un plasmide, des fois on dit que le plasmide a une origine de réplication qui fonctionne dans une cellule et pas dans un autre organisme.  [...] Ensuite un plasmide peut coder pour ses propres enzymes car il possède le gène. Mais les enzymes peuvent aussi être issues du génome de l'hôte ou du chromosome bactérien. Donc il est possible que si une enzyme nécessaire à la régulation de ton plasmide ou à son origine de réplication est absente dans la cellule transfectée et non codée par le plasmide alors l'origine de réplication sera non fonctionnelle. Mais là ce n'est qu'une hypothèse. ^^.  [...]

[Biologie Moléculaire] Vecteur d'expression

Les gènes codant pour une resistance à l'ampicilline par exemple permettent de sélectionner les bactéries qui ont reçu le transgène. Mais pour ce qui est de l'amplification pour obtenir de grandes quantités de plasmide, c'est tout bête mais l'origine de réplication permet de répliquer le vecteur dans une même bactérie ou bien chez les cellules filles aprés mitose.  [...] Et enfin dans un exercice on introduit un vecteur viral par voie intraveineuse et on observe que les différents tissus de l'organisme n'expriment pas la même quantité de protéine recombinante. En fait si je comprend bien on a injecté un virus portant le gène d'interêt dans l'organisme ce qui va permettre d'injecter le matériel génétique dans la cellule hôte Dans ce cas comment expliquer les variations observées Est-ce que c'est dû au fait que le virus n'infecte qu'un type paarticulier de cellule.  [...]

[Biotechnologie] Clonage Eucaryote

Voilà, j'ai ecrit que pour la production de protéines dans des cellules de mammifères, il fallait utiliser un plasmide contenant un site polyA, une origine de réplication virale ainsi qu'un promoteur de type viral.  [...] Oui mais pour utiliser un plasmide dans une cellule de mammifères, faut il alors qu'il y a ait une origine de réplication de type virale ainsi qu'un promoteur type viral.  [...]

[Biotechnologie] ADN recombinant réplication dépend du cycle cellulaire ?

Le plasmide (vecteur) qui fait partie de l'ADN recombinant sera injecté dans le cytoplasme d'une bactérie comme e.coli et donc la réplication de l'ADN recombinant sera dépendant du cycle cellulaire ou non.  [...] Selon les bactéries et les vecteurs utilisés, la réplication plasmidique est indépendante de la réplication chromosomique.  [...]

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

[Biologie Moléculaire] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères.  [...] Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères.  [...]