• Forum - Rapport, Quantité, ADN, Expression

[Biologie Cellulaire] Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire

Rapport quantité ADN/expression protéique Transfection transitoire.  [...] En fait je souhaiterais avoir une expression plus faible de ma protéine d'intérêt (et pas forcement plus de cellules transfectées...).  [...]

[Biologie Moléculaire] extraction d'ADN

j'aime bien vous poser une question très précise en ce qui concerne l'extraction de l'ADN a partir des graines de soja. la quantité d'ADN extraite a partir de 100mg de poudre peut elle atteindre 900 ng /ul.  [...] petite précision, l'ADN absorbe les UV a 260 nm, donc je suis sur de la longueur d'onde que j'ai choisi pour la lecture de la densité optique.De plus je trouve que l'expression de la concentration se fait par microlitre indépendamment du volume final du moment que chaque ul contient une quantité donné d'ADN.  [...]

Mycobacterium Tuberculosis, méthode SCOTS.

Dans le paragraphe Analysis of cDNAs Encoding Mycobacterial Sigma Factors (RESULTATS), je n'arrive pas à faire le rapport entre l'expression des ADNc obtenus à partir des cultures microbiennes, et les ADN correspondant aux facteurs sigmas.  [...] Ce que je comprends c'est que les ADNc obtenus à partir des cultures microbiennes s'hybrident avec des ADN correspondant à des facteurs sigmas obtenus indépendamment.  [...]

[biochimie] activité spécifique d'un enzyme selon la concentration

On rapporte l'activité d'une enzyme spécifique sur une quantité d'enzymes totale. Ca veut dire que tu as d'autres protéines dans ton échantillon qui ne participent pas à l'activité dont tu mesures car elles ont une autre action, agissent sur un autre substrat etc..).  [...] Tu as raison. l'activité spécifique étant une activité exprimée par mg de protéines généralement. donc pour un même extrait enzymatique, l'expression de l'activité spécifique ne changera pas puisque l'activité augmente de manière proportionnelle à la quantité d'enzyme et que c'est un rapport.  [...]

Différents types de RT PCR

Plus le Ct est faible et plus ça veut dire que tu obtient ta quantité critique d'ARN, rapidemement. Donc, si tu me suis, si tu as un ARN1 avec un Ct de 22 et un ARN2 avec un Ct de 27 par exemple, ça veut dire que l'ARN1 apparait avec seulement 22 cycles PCR alors qu'il en faut 27 pour obtenir la même quantité d'ARN2.  [...] ...donc tu en déduit que l'ARN1 était initialement pr ésent en plus grande quantité, par rapport à l'ARN2. on peut donc connaitre l'expression de ces gènes (correspondant aux ARN 1 et 2) et savoir lequel est le plus exprimé dans la cellule, pour une condition donnée.  [...]

[Biologie Moléculaire] Essais luciferase promoteur miRNA

La question que je me pose est la suivante. Etant donne que l'expression des miRNA est differente des mRNA (a priori plus faible), est ce qu'il ne serait pas judicieux d'augmenter la quantite de plasmide promoteur+luciferase dans mon experience (par rapport au protocol pour promoteur mRNA).  [...] Si quelqu'un a deja fait un essai luciferase sur des promoteurs miRNA, je suis interesse pour savoir la quantite de plasmide utilise (par rapport aux autres plasmide transfectes).  [...]

Expression de gène

On sait que les ARN totaux d'une cellule correspondent à l'expression génétique puisqu'ils sont issus des gènes ADN (en fait on sélectionne les gènes par le produit de ceux-ci qui est l'ARNm). Le but est de transformer ces ARNm en ADN complémentaire (ADNc) par rétrotranscription et de les amplifier par PCR (chacun des ARNm est amplifié proportionnellement à sa quantité de départ dans la cellule).  [...] Autre différence de taille. la puce à ADN est une technique a grande échelle, c'est à dire qu'lle permet de mesurer l'expression absolue ou différentielle d'une grande quantité de gènes en même temps (plusieurs milliers) alors que l'hybridation in situ est ciblée.  [...]

calibration entre différents run en QPCR

Dans mon labo on fait une quantification relative à un house keeping gene. Pour cela, tu dois choisir arbitrairement un gène dont la variation d' expression est la plus faible possible (on travaille sur des échantillons d'oreille de souris et on a choisit bêta-actine).  [...] Grâce à cette quantification relative, tu te retrouves avec une variation minime de l' expression en fonction de la quantité d' ADN introduite et tu peux gérer des résultats de différentes expériences plus sereinement.  [...]

"alleles dominantes"

Par exemple, si un allèle code pour une protéine dont la quantité n'est pas limitante dans l'expression d'un phénotype, il sera dominant par rapport à un allèle muté incapable de coder la protéine fonctionnelle.  [...] mais ca cest la co-dominance, non (tu penses aux Belles de Nuit) En fait je pense que jai compris... cest le nom dominance qui nest pas approprié (dailleurs apparament l'expression allele dominante est une erreur - cetait la reponse de mon prof a ma question).  [...]

[Biochimie] cDNA - regulation des genes

On vient hybrider sur chacun de ces puits, 2 ARNm extraits a partir d'un tissus donnée. Cette hybridation va donner une couleur proportionel a la quantité d'ADN. vert ou rouge veut dire beaucoup ou pas beaucoup. Si on compare les profils d'expression de 3 types cellulaires données, le type cellulaire 1, 2 et 3, on va voir que chacun de ces type cellulaire a son profil d'expression spécifique de la lignée cellulaire donnée.''.  [...] Un ADNc (= ADN complémentaire) correspond à la copie ADN d'un ARNm mature (sans les introns). Ces ARNm sont les produits témoignant de la régulation et de l'expression du génome d'une cellule.  [...]