• Forum - Rapport, Contrôle, Positif

[Biotechnologie] Résultats d'un criblage biologique...

Quoi qu'il en soit, lorsqu'on fait un crible, la valeur du signal n'est pas importante. On compare toujours la valeur obtenue avec l'inhibiteur par rapport à un contrôle positif (sans inhibiteur - signal max) et un contrôle négatif (sans ligand marqué - signal min) et on obtient ainsi un pourcentage d'inhibition.  [...] On compare toujours la valeur obtenue avec l'inhibiteur par rapport à un contrôle positif (sans inhibiteur - signal max) et un contrôle négatif (sans ligand marqué - signal min) et on obtient ainsi un pourcentage d'inhibition.  [...]

[Génétique] comment savoir qu'un gène est sous silence

- induire la traduction puis réaliser un Western blot avec un anticorps, si il n'y a aucune révélation c'est qu'il n'y a pas de protéine et donc que le gène est sous silence.   [...] -faire une Qpcr et mesurer l'intensité émise par rapport au contrôle positif.  [...]

[Immunologie] Lire une courbe de cytométrie de flux

Concernant les axes, dans ce cas, sur l'axe des ordonnées tu as une valeur relative à la quantité d'évènements positifs, autrement dit, plus c'est haut, plus il y a d'évènements. Sur l'axe des abscisses, tu as une valeur relative à l'intensité de fluorescence, donc plus tu te déplaces vers la droite, plus le marquage est intense.  [...] Ceci permet de clairement affirmer que le marquage est positif pour les deux CD en présence de CpG-2006 (on voit bien le déplacement vers la droite de l'histogramme grisé par rapport au contrôle).  [...]

[Biotechnologie] bruit de fond et cytométrie

Juste pour info, quand tu fais un marquage en cytométrie, il faut toujours faire un contrôle négatif. Ce contrôle mesure le bruit de fond (fixation non spécifique, excès d'Ac, ect). C'est par rapport à ce contrôle que tu peux dire si un marquage est positif ou non.  [...] Les billes sont calibrées en taille et en intensité de fluorescence (c'est le cas des calibrite de chez BD ou des autres). On connait les valeurs à atteindre lorsque l'alignement est correct. Toute déviation par rapport aux résultats attendus signifie, généralement, un désalignement du cytomètre (se traduit par une perte des performances comme la sensibilté et ou une augmentation du bruit de fond).  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de clonage dans le pGEM-T easy vector.

Déjà une chose, ça a pris plus de temps que d'habitude pour avoir des colonies. Le contrôle positif fait avec un de mes vecteurs et les cellules a donné des colonies après une nuit (normal). Pour mes plaques de transformation, j'ai du attendre 1 jour pour avoir des coloniees bien visibles.  [...] Encore une petite chose par rapport à l'Arc qui est arrivé lors de l'électroporation. Le background control de promega était ok, pas d'Arc. Par contre, LEUR contrôle positif avec les 2 ul de leur ADN à insérer m'a donné un Arc. Je ne comprends pas pourquoi vu que j'ai juste suivi le protocole.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

On a fait amplifier de l'ADN de certains de nos échantillons et on faisant migrer les produits sur gel, il s'est avéré que y a eu contamination (révélation d'une bande sur gel correspondant au contrôle négatif).  [...] Après il est aussi possible que les contaminations observées ne proviennent pas d'un des réactifs mais simplement du fait de la manipulation de l'ADN a proximité du contrôle négatif. Ca peut expliquer pourquoi dans une PCR sans ADN tout soit blanc.  [...]

[Biologie Cellulaire] Induction d'apoptose 3T3

Je cherche actuellement à induire l'apoptose de 3T3 swiss albino pour effectuer le contrôle positif d'une manip de cytométrie (autre que la staurosporine, trop chère pour le labo...). Quelqu un aurait-il une idée.  [...] En contrôle positif d'apoptose/nécrose, je pensais tester un traitement à la camptothécine et un traitement avec un milieu acidifié à 5,5 pendant 2h. Qu'en pensez-vous.  [...]

[Biologie Moléculaire] Probleme de clonage avec pT7Blue

Si j'ai bien compris, on a effectué le controle positif durant la reaction de end conversion qui est = 2uL des produits de la PCR +X uL de Nuclease-free Water+0.5 uL de End conversion mix.Le controle positif se fait en remplacant les produits de la PCR par le blunt vector control insert.  [...] le contrôle positif set à vérifier que tu as bien ton insert et vecteur, soit pour vérifier ton électrophorèse (je ne sais plus ou alors les deux).  [...]

système de double hybride

Vu que l'on est très sérieuc au laboratoire, on effectue une série de contrôle en même temps que le test principal. Ces contrôles ont pour objectif de vérifier que notre gène rapporteur ne s'exprime que lorsqu'il y a interaction entre les deux activateurs de GAL4.  [...] Pour le contrôle positif, on fait comme dans le cas A, c'est à dire les protéines natives de la levure, afin de vérifier que tout fonctionne bien. Puis deux contrôle négative, B et C, qui permette de vérifier si la fusion PCR-1-GAL4BD et AST-1-GAL4AD sont incapable d'activer le gène rapporteur lorsqu'ils sont seuls.  [...]

[Biochimie] Expression protéique

La protéine est détectée par Western blot et le contrôle positif est correcte. A quel niveau sont sensé agir les régions régulatrices Lors de la traduction N'est ce pas un peu tard une fois que les ARNs sont synthétisés.  [...] L'ARN semble suffisamment exprimé puisqu'il est détecté assez clairement avec 30 cycles d'amplification. Sur WB j'obtiens deux bandes de tailles différentes pour mon contrôle positif mais seulement une bande très très haute dans le gel (très grosse protéine) comparé aux autres dans le reste de mes conditions.  [...]