• Forum - Rapport, ADN, échantillon

dNTP dUTP et UNG

Mais à priori utilisé des dUTP apporte une certaine sécurité à la manip' en cas de contamination avec des produit de PCR, mais pourquoi.   [...] le concept du truc, c'est que le produit de PCR ne puisse pas servir de matrice dans une autre PCR, assurant que ce qu'on détecte, c'est bien l'ADN de l'échantillon, et pas une contamination par une autre réaction (parce qu'au bout d'une PCR, on a des kilos d'ADN, c'est donc très facile de faire des faux positifs quand le contaminant éventuel est en quantité écrasante par rapport à l'ADN échantillon).  [...]

[Biologie Moléculaire] rapport 260/280 et 260/230

après avoir quantifié de l'ADN par mesure de l'absorbance, il m'a été demandé d'analyser les rapport 260/280 et 260/230 pour vérifier la pureté de l'échantillon.  [...] Mais ton ration 260/230 est trop bas, et montre que tu as une contamination par des produits organiques (généralement des tampons) dans ton échantillons.  [...]

Normalisation RT-PCR quantitative

La PCRq (je ne mets plus temps réel, c'est trop long) indique le cycle au cours duquel la fluorescence dépasse un certain seuil (fixé arbitrairement par l'utilisateur... dans la phase exponentielle ). Ce cycle est noté Ct (threshold cycle = cycle seuil ). La valeur du Ct est proportionnelle au nombre de copies de l'ADN amplifié (=cible) présentes au départ dans l'échantillon (d'ailleurs c'est ce qu'on essaye de mesurer avec la PCRq).  [...] En gros, il te permet de dire j'ai [2 x delta Ct] fois plus d'ADN cible dans cet échantillon par rapport à cet autre échantillon, c'est-à-dire le plus souvent, mon gène est n fois plus exprimé dans cette condition spécifique par rapport à ma condition témoin.  [...]

[Biologie Moléculaire] dosage d'ADN sans spectrophotomètre

tu dis juste, c'est pour une PCR simple. tu peux me donner plus de tdétails sur les dilutions à effectuer pour ajuster l'échantillon par rapport à l'ADN de référence.  [...] Je pense qu'il veut dire qu'il faut que la concentration de ton échantillon doit être compris dans la gamme de concentration de ton marqueur. Si elle est au dessus ou en dessous, tu ne pourras pas calculer sans être certaine du résultat.  [...]

recherche d'un contact par mail avec un laborantin

Quand au fait de pouvoir séparer l'ADN de plusieurs dans un même échantillon, cela n'est pas possible avec les techniques dites classiques. Avec un séquençage de troisième génération (séquençage plus rapide et avec moins de matériel génétique), cela doit être possible, et encore, probablement difficile.  [...] Ce qui amène également un autre problème. Si on rajoute un échantillon F dans le tube Z, on ne pourra pas identifier son ADN au complet (tout les micro-satellites) à cause de ces bandes identiques. Mais je cherche la petite bête.  [...]

[Biologie Moléculaire] Quantité d'ADN

Je dispose d'un échantillon contenant un extrait d'ADN. Cet échantillon a été dilué au 1/100. Je mesure la DO à 260 nm pour calculer la quantité d'ADN contenue dans l'échantillon.  [...] Oui mais pas au niveau de l'absorbance hein. D'abord tu fais ton calcul (ou ton report de valeur sur ta droite étalon) et ensuite tu prend en compte le facteur de dilution.   [...]

Différences d'ADN entre les ètres vivant ?

Imaginons que tu me demandes de te fournir un échantillon de mon ADN pour faire une électrophorèse et que je te passe un échantillon contenant de l'ADN de salade, quelque chose te mettrait la puce à l'oreille ou non.  [...] Alors disons qu'on ne fasse pas de PCR, et que l'on le tente de faire migrer par électrophorèse l'ADN présent dans l'échantillon (si c'est possible). Quelque chose pourrait-il vous alerter.  [...]

ADN - et communication

S'ils enlevaient l'échantillon d'ADN, ces ondes ne disparaissaient pas, comme on pouvait s'y attendre, mais persistaient, sous forme de structure régulière, comme s'il y avait toujours un échantillon maétriel. Comme l'ont démontré des expériences-contrôles, ces ondes devaient provenir, sans aucun doute, de l'ADN qui n'était plus présent.  [...] S'ils enlevaient l'échantillon d'ADN, ces ondes ne disparaissaient pas, comme on pouvait s'y attendre, mais persistaient, sous forme de structure régulière, comme s'il y avait toujours un échantillon matériel.  [...]

[Biologie Moléculaire] PCR quantitative

Théoriquement en utilisant une gamme standard avec des quantités connues d'ADN tu peux tout à fait exprimer tes résultats en ng d'ADN dans ton échantillon, ce que l'on appelle de la quantification absolule.  [...] Une solution Utiliser ton échantillon pour faire une gamme standard pour vérifier l'efficacité d'amplification, mais dans ce cas tu n'auras bien évidement pas de quantification absolue, tu ne pourras faire que du relatif par rapport à un gène de ménage, sans compter l'augmentation des coûts due au fait que théoriquement il faudrait faire une gamme pour chaque échantillon.  [...]

[Biologie Moléculaire] distribution de la taille de fragment d'ADN pour un échantillon de petite quantité

Je recherche un protocole ou une méthode permettant de visualiser la taille de fragment d'adn pour un extrait d'ADN de très faible concentration (eg. 1pg-1ng).  [...] Oui effectivement le Tm est un indicateur de la taille. Mais mon soucis est que je vais me retrouver avec une population comprenant des tailles de fragments différentes. Et ce que je recherche c'est d'identifier la taille de chacun des fragments, mais également la proportion de chaque groupe de fragment.   [...]