• Forum - Question, Utilisation, Rapporteur

[Biotechnologie] beta galactosidase

Quand on utilise le gène de la beta gal comme gène rapporteur in vivo chez l'animal par exemple, quel est le substrat qui donne la couleur bleueEst-il endogène et peut visualiser la coloration in vivo ou faut-il faire une biopsie et mettre les cellules en contact avec le substrat ex vivo pour visualier les cellules transduites... Merci d'avance.  [...] Oui pardon, ils je ne sais pas qui sais mais c'est sur une présentation d'un de mes cours, et oui dans ce cas préis c'était sur l'homme, puisqu'il s'agissait d'un essai de phase clinique, mais le doute a surgi en moi et j'ai élargi la question à l'utilisation de ce gène rapporteur in vivo.  [...]

[Génétique] Gène rapporteur

Pour une séance de TP j'ai des questions à préparer. L'une d'elle est.  [...] Quels sont les biais ou interférences possibles liés à l'utilisation d'un gène rapporteur.  [...]

[Biologie Moléculaire] séquences régulatrices

Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question.  [...] Il y a de l'idée. En premier lieu, je suppose que tu compte isoler ta séquence depuis une banque d'ADN génomique par PCR...Dans ce cas, une fois ta séquence amplifiée, un séquençage est la première chose à faire. En effet, dans le cas où tu n'isole pas la bonne séquence, la fusion avec un gène rapporteur peut te donner un résultat faux-positif (ou faux-négatif si un problème survient pendant la réalisation de la construction).  [...]

hybridation in situ vs rapporteur

Pour étudier la localisation de l'expression d'un gène (à l'échelle cellulaire, pas subcellulaire), quel est l'intérêt de l'hybridation in situ par rapport à l'utilisation d'un rapporteur sous contrôle du promoteur de ce gène (ou l'intérêt de cette dernière technique par rapport à la 1ere).  [...] Si la manip marche bien, l'hybridation in situ est plus rapide que le gene rapporteur, car il n'est pas nessaire de transformer l'organisme en question. Par contre, pour l'insitu, on doit tout recommencer si l'on veut changer une condition experimentale, alors qu'avec le gene rapporteur, on peut garder l'organisme transforme.  [...]

Y a-t-il une différence entre un spécimen ogm et un non ogm ?

Je ne sais pas pour le BT exactement comment ils on fait, mais si on se base sur les méthodes couramment utilisées, comme l'utilisation de T-DNA, plasmide Ti et agrobacterium, alors en assumant que ce peuple possède notre connaissance en biologie moléculaire, alors oui il pourra, ou du moins si ils étudient très précisement le génome, ils peuvent se demander pourquoi comme de par hasard on retrouve des clusters de sites de restriction qui encadrent la partie codante du gène, (qui sont souvent utilisés pour insérer le gène dans le plasmide afin que la bactérie transmette ce gène, les plasmides possèdent plusieurs sites pour laisser l'experimentateur choisir l'enzyme qu'il veut pour ouvrir le plasmide et insérer le gène dedans).  [...] Afin que le mutant soit séléctionné, on doit pouvoir vérifier qu'il possède bien l'insert qu'on voulait lui ajouter, et cela se fait souvent via l'utilisation d'un gène rapporteur, cette population d'extraterrestre putative pourrait se demander ce que ce gène fait là si ce n'est pas un gène de plante.  [...]

[Biologie Moléculaire] Tester la force d'un promoteur

J'ai une question. On nous dit souvent que tel promoteur est fort, tel autre faible. Comment a-t-on procédé pour connaître la force d'un promoteur.  [...] on a nous fait lire une publication en cours qui porte sur l'utilisation des genes rapporteurs. Les auteurs testaient la fiabilité du gene rapporteur LUC dans des situations où on a des régulations avec de l'APMc. Ils conlcuaient sur le fait que LUC ne traduisait pas directement la régulation transcriptionnelle des genes induite par un traitement quelquonque.  [...]

[Biotechnologie] Plasmide recombinant

7) Lors de l'utilisation d'agrobacterium tuméfaciens, on crée un plasmide contenant un gène de résistance pour E.Coli et pour la plante, une origine de réplication E.Coli, une origine pour Agrobacterium, et puis deux séquence front gauche et front droit dans lequel on retrouve le gène d'intérêt ainsi qu'un gène de sélection pour la plante.  [...] Systématiquement les deux A quoi sert le gène de résistance et à quoi sert le gène rapporteur Précisément, pas comme dans ta question.  [...]

mesure de l'expression d'un gene

Il est donc possible de remplacer le gene en question par un gene rapporteur (dont l'activité de la proteine est facilement quantifiable B-galactosidase, luciferase etc...).  [...] Sinon, pour repondre a ta question, a ma connaissance il n'y a pas d'ARNm suffisamment stable pour compenser un faible taux d'expression. En plus il semnle que les genes faiblement expimes possedent aussi un biais d'utilisation des codons particulier, indiquant aussi que la traduction n'est pas optimale pour ces genes.  [...]

[Biochimie] recombineering...

Tu peux peut-être effectuer l'insertion d'un gène rapporteur qui est en fusion avec une région 5'-UTR, si cela se trouve...Ainsi ton rapporteur bénéficiera des séquences d'initiation de la traduction requises pour sa traduction.  [...] Par contre l'idée d'utiliser une séquence IRES semble plausible, se système existant bien chez les droso (voir Pubmed. drosophila ires). Tu pourra tester ta construction chez la levure ou autre culture cellulaire avant de te lancer, pour voir si ton rapporteur est bien traduit.  [...]

Vecteur de clonage, PCR et vecteur d'expression

Ils disent ensuite que le produit de PCR () est purifié par électrophorèse sur gel d'agarose et ensuite il est encore inséré dans un autre vecteur entry vector en utilisant une deuxième PCR(). Puis ils utilisent enfin un vecteur d'expression pour obtenir la protéine de fusion GST-gene d'intérêt.  [...] 2. on utilise rarement la séquence entière lorsque l'on fait du double hybride et l'on préfère fragmenter les protéines proies et appat en plusieurs domaines que l'on testera chacun à leur tour.   [...]