• Forum - Question, Technique, ARN

[Biologie Moléculaire] Que devient l'ARNr dans une reaction de RT

Par contre, j'aurai une petite question un peu plus technique si vous voulez bien. vous dites que vous passez vos ADNc sur une puce ARN nano. ça marche Ne faudrait-il pas une puce ADN.  [...] 2/ une puce (c une toute petit plaque avec 16 mini puits) dans chaque puits tu dépose un gel qui contient un Dye spécifique de ton ARN (contrairement au BET) tu ajoutes ensuite un tampon et un ladder de poids moléculaire. L'appareil analyse tes échantillons 1/1 en commençant par le marqueur qui sert de PM et d'étalon.  [...]

[Biologie Cellulaire] Grattage des cellules, sur glace ?

J'ai une petite question d'ordre technique. Je procède en ce moment à des extractions d'ARN. Pour cela, je dois d'abord gratter mes cellules au fond de flasques, les récupérer et les faire culotter avant de les stocker à -30°C. J'ai l'habitude de gratter des cellules en les gardant sur glace après les avoir lavées deux fois au PBS.  [...] pas forcément grave. Mais c''est quand meme pas pratique de ne pas avoir de glace sous la main... Pour la qualité de vos ARN, ben ça dépendra un peu de vos cellules quand même. Et tu temps pris à les gratter.  [...]

[Biologie Cellulaire] Biolistique

Et j'ai juste une question sur la biolistique qui consiste à fixer ces ARN sur des petites billes de metal puis les bombarder sur la cellule pour incorporer les ARN dans la cellule.  [...] on utilise ces techniques pour la fabrication d'organismes génétiquement modifiés. je sais que ces billes sont recouvertes par l'or ou par le bronze.  [...]

Y a-t-il une différence entre un spécimen ogm et un non ogm ?

Ca à l'avantage, qu'au lieu d'ajouter d'ajouter l'allèle en 'linserant (et donc avec tout ce qui est nécessaire à l'insertion d'un gène), tu le crée directement, tu peux aussi te servir de ca pour faire apparaitre un codon stop et inhiber la protéine en question si tu veux faire du knock out sans insertion de T-DNA dans le gène (l'insertion de T-DNA est visible, l'insertion d'un codon stop est tout ce qu'il y a de plus naturelle) ou au contraire faire disparaitre un codon stop, modifier un acide aminé pour le rendre phosphorylable (si a cet endroit il s'agit d'une sérine dans une autre accession mais dans la tienne il s'git d'une forme non phosphorylable ou la sérine a été remplacée, induisant un phénotype différent par incapacité d'etre phosphorylée) ou même la rendre toujours active (ou inactive) en remplacnt cet acide aminé par un acide aspartique (charge négative mimant la phosphorylation) dans le but d'augmenter une caractéristique de ton organisme.  [...] Reprenons la question. existe-t-il un moyen théorique, pour les savants de cette planète d'identifier, en regardant tout ce qui se trouve à l'intérieur des cellules du maïs, l'adn, les arn etc. lequel des deux épis est issu de la technique OGM.  [...]

Expression de gène

Donc si j'ai bien compris, la technique de PUCES à ADN consiste à créer artificiellement la séquence complémentaire de l'ARN correspondant au gène qu'on étudie et on va donc insérer via un puces cette séquence afin d'en trouver une complémentaire pour trouver dans quelle cellule s'exprime le gène en question, c'est bien ça.  [...] Autre différence de taille. la puce à ADN est une technique a grande échelle, c'est à dire qu'lle permet de mesurer l'expression absolue ou différentielle d'une grande quantité de gènes en même temps (plusieurs milliers) alors que l'hybridation in situ est ciblée.  [...]

RT PCR quantitative

Dans le 2e cas, il faut un appareil spécial (très cher). Il y en a en général un pour tout un institut. Le plus simple est d'aller voir les personnes qui l'utilisent déjà pour avoir les réponses à tes questions.  [...] Comme ça la DNase est eliminée au lavage. Après l'élution tu as des ARN tous propres, sans DNase (problématique pour l'étape de PCR suivante.) et sans ADN génomique qui te donnerait des résultats faussement positifs et sur-estimés.  [...]

[Biochimie] Améliorer la quantité, qualité et pureté d'une extraction d'ARN

J'ai effectué une extraction d'ARN à partir des cellules THP-1 humaines par deux techniques différentes. la technique d'extraction par précipitation en utilisant le trizol et la technique par extraction par colonne utilisant le kit direct-zol ARN miniprep et des colonnes appel zymo-Spin IIC.  [...] Le début de l'extraction est très important. conditions d'homogénéisation (mécanique, chimique), il faut se mettre à froid, ainsi que la quantité de matériel (trop est pire que pas assez.). Comment avez vous procédé.   [...]

criblage differentiel

je ne me rapelle plus très bien mais est-ce que le criblage différentiel ne serait pas basé sur la technique de soustraction de banques d'ARN.  [...] Si c'est cela, c'est une technique utilisée pour étudier les ARN produits dans une condition précise, par exemple l'effet d'un traitement.  [...]

Rt-pcr

Elèves en 1èreS, nous faisons un TPE portant sur la rage (lyssavirus, génome à ARN). Nous en sommes à la partie du diagnostic et nous ne comprenons pas trop une chose. la détection des ARN du lyssavirus par la RT-PCR. Nous savons que la PCR sert à dupliquer un brin d'ADN.  [...] on peut alors chercher a détecter l'arn mais il faut savoir que l'arn est beaucoup beaucoup plus petite que l'adn génomique pour détecter alors un arn on utilise la RT-PCR pour pouvoir avoir beaucoup plus d'arn notre prof a la fac nous expliquer que c'est une technique extrêmement sensible et que dans un unique postillon humain on avait.  [...]

[Microbiologie] ADNr 16S ou ARNr 16S ?

les gènes des ARN 16S sont utilisés pour distinguer les espèces bactériennes Les gens du métiers parlent souvent de PCR 16S pour parler de la technique.  [...] Enfin, pour transformer de l'ARN en ADN, on utilise une technique appelée RT-PCR (pour Reverse Transcription, à ne pas confondre avec Real Time qui est différente).  [...]