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[Biologie Moléculaire] Aide gel électrophorèse

j'aurais une petite question je voudrais mettre en page des gel d'électrophorèse comme dans les articles scientifique quand ça ressemble a une sorte de tableau avec les bandes.  [...] Personnellement, quand je faisais des électrophorèses, j'utilisais le logiciel Image Quant TL qui, avec une image scannée du gel, me donnait les bandes relatives et les poids moléculaires tant marqués sur le gel que sous forme de tableau.  [...]

[Biochimie] purification poids moléculaire

bonjour. Je puriife une protéine, mais c'est étrange, car même purifiée, en gel filtration j'ai 2 pics (l'un à env 300kDa, l'autre à env 185kDa). Pour les 2 pics j'ai aussi 2 bandes en SDS-PAGE. J'ai un peu de mal à l'interprêter je dois dire.  [...] Mais je propose, et j'attends vos commentaires, que les 2 bandes en SDS-PAGE soient en fait la même protéine avec un légère différence (post-traductionnelle), et donc j'aurais un homotétramère.  [...]

western blot

s'il vous plait j'ai besoin de votre aide. J'ai fait un SDS-Page, puis le Western blot sur 2 gels au même moment. Je constate déjà que le gel que j'ai colore immédiatement après le sds page, l'apparition des bandes est très faible. Pourtant le gel colore après western blot, nous montre une visualisation des bandes intenses.  [...] D'où déjà, nous avons pense au fait que le transfert total des protéines par semi-dry n'a pas eu lieu. Or nous avons observe le transfert partiel du marqueur. De ce fait nous avons utilise le gel transféré et avons refait le transfert par semi-dry et nous observons un transfert total.   [...]

Le gel natif

premièrement, j'ai réalisé un SDS-Page puis transfert/révélation par l'anticorps anti-tag pour vérifier la taille du monomère, mais j'ai eu également des bandes qui sont presque au double et le triple de ce poids... donc il s'agit probablement de complexes.  [...] Ce qui me pose problème c'est que pour un gel natif on ne met pas de détergent pour observer les interactions ou la forme de la prot. Après les gels natifs c'est loin pour moi, mais en tous cas je ne pense pas que tu observes des complexes en sds-page. Si tu as vraiment envie de savoir ce que c'est tu px tjr voir en spectro de masse ap excision de la bande d'intérêt de ton gel suivi d'une digestion in gel par de la trypsine. Bon courage.  [...]

pro-caspase 12 et caspase 12

T'as raison c'est un peu étrange. En gros ils interprètent la baisse de niveau de procasp12 comme son activation, dans ce cas je vois pas pourquoi ils montrent pas non plus la casp12 active (qui devrait logiguement augmenter). Bizarre que les reviewers aient pas relevé ca.   [...] Une dernière question pourquoi on voit deux bande dans chaque ligne (2bandes pour la t-JNK et 2 bandes pour la p-JNK) A quoi correspondent ces 2 bandes.  [...]

[Biologie Moléculaire] Eléctrophorèse

Le PAGE SDS dénature les protéines en rompant les liaisons hydrogène, donc si on obtient deux bandes à 50000 et 30000 cela signifie que la protéine est multimérique et contient au moins 2 sous-unités de ce poids moléculaire là.  [...] Je m'explique, oilà ma théorie et si elle est fausse, alors tout mon raisonnement est faux. si on prend le cas de l'hémoglobine, constituée de 4 chaînes de globine. 2 alpha et deux bêta, identiques 2 à 2. Si on fait une electrophorèse Page SDS, alors, on devrait obtenir 2 bandes.  [...]

Ecrans, lumière bleue et sommeil

Je suis assez grand garçon pour avoir déjà éliminé dans les heures qui précèdent le sommeil les navigations trépidantes et flashy ou les sujets de forum et de tchat qui énervent... Lire sur écran ou sur ma tablette le genre de choses que j'aime lire à cette heure-là (présentations de livres ou de films, bandes dessinées) était selon elle à bannir, au seul motif de cette question de lumière bleue puisqu'elle me laissait tout à fait libre de le faire sur papier.  [...] Donc ce que je demandais ici c'est bien des références sérieuses quant aux effets toutes choses égales d'ailleurs de la lumière bleue des écrans sur le sommeil. considérer ces effets comme très importants est-il plus qu'une hypothèse, voire une lubie, qu'aucune étude scientifique sérieuse n'a validée, et dont on ne parlera plus passé un effet de mode qui peut toucher même les milieux professionnels et médicaux J'ai croisé maintes fois de tels phénomènes dans ma vie de patient épris de rigueur scientifique.  [...]

[Evolution] Positions actuelles sur la théorie de l'évolution - Page 2

Vous me direz peut etre que je n'ai qu'à chercher sur le net, mais je prefere avoir l'avis de personnes ayant lu les ouvrages. Je cherche plutot un bouquin pas forcement super pointu au niveau scientifique, mais plutot qui insiste sur l'interpretation generale des phenomenes avec pourquoi pas un peu de philo...@+.  [...] Tu peux également jeter un oeil à Le gène égoïste (R. Dawkins, ed. Odile Jacob), étant donné que c'est surtout au niveau allélique que tu te poses pas mal de questions. C'est cependant à lire avec beaucoup de précaution, l'auteur remettant en cause pas mal de choses et exposant des idées qui sont loin de faire l'unanimité au sein de la communauté scientifique.  [...]

[Biochimie] Activité enzymatique

Le SDS page pourrait etre une solution intéressante mais comme tu le dit c'est assez galère à interpréter. J'ai bien une idée du poids moléculaire des enzymes mais comment etre certain que les bandes observées correspondent bien à mon enzyme (pas d'anticorps).  [...] Le problème du pH c'est qu'il peut aussi hydrolyser certains ponts peptidiques si je ne dis pas de bêtise. Ajouté au changement de conformation dû au changement de charge des radicaux R, ça diminue d'autant les chances de retrouver la structure tertiaire/quaternaire version d'origine.   [...]

[Biologie Moléculaire] Mutagenèse par PCR : Tm des oligos

Encore une question puisque vous parliez de bandes. on a fait une migration sur gel pour voir si ça a marché et on avait pas de bandes (sauf celle des oligos) mais par contre les marqueurs de taille ont très bien migré. Ca ne veut pas forcement dire que notre PCR n'a pas marché non Sinon pourquoi elle aurait pas marché Erreurs de manipulation plasmide incorrect.  [...] Justement la suite du TP était une digestion par Dpn1 et après de transformer des bactéries avec ce produit de PCR. nous avons eu quelques colonies mais pas assez de temps pour les laisser grossir et pouvoir voir qu'elle étaient vertes ou bleues, et en plus on était pas équipé pour le voir.   [...]