• Forum - Question, Enzymes, Température, Tampon

[Biochimie] dosage enzyme pour quoi utiliser le bain-marie ?

Je pense que pour la préparation du tissu dans le tampon, on dit qu'il faut travailler dans la glace 4C°,c'est pour inactiver l'enzyme(par le froid) et éviter l'augmentation de la température du tissu lors du broyage et de ce fait éviter la dénaturation de l'enzyme, car une enzyme soumise a basse température est inactivé mais elle n'est pas dénaturée (et qui est donc de ce fait détruite comme dans le cas d'une haute température).  [...] je crois que c'est pour travailler à une température donné pour pouvoir comparer ses résultats avec les normes ou d'autres résultats d'autres laboratoire, les conditions standards donc.  [...]

[Biochimie] Amorces ARN/ADN et Réplication/PCR

Ensuite, l'ajout de dNTP,tampon, Taq pol, haute température, et hopla, on a environ 10^20 à 10^30 amplifications, selon le rendement et la qualité recherchée.  [...] N'importe quelle extrémité 3'OH (ADN ou ARN) peut servir d'amorce pour les DNA polymérases. On utilise des amorces ADN en PCR parce que l'ADN est plus stable et plus facile à synthétiser que l'ARN.   [...]

[Biologie Moléculaire] Western blot sur des echantillons de foie murins

Pour les extraits, j'utilise ce protocole sur du foie et sur des cellules, ça revient au même. Il faut faire attention a ne pas mettre trop de tissu dans le tampon, l'idéal étant de peser environ 30mg pour voir ce que ça fait. Grosso modo, une tete d'allumette dans 500µL et tu as de quoi faire des centaines de western.  [...] En fait, tes solutions stock pour le tampon de lyse, a quelle temperature sont-elles stockées A temperature ambiante ou a 4°.  [...]

Conséquence de la concentration d'un tampon électrophorèse sur l'intensité

Le kit utilisé permet simplement de montrer l'action des enzymes de restriction aux élèves de terminales S. L'alimentation utilisée est, selon le fournisseur, étudiée spécialement pour réaliser ce type de gels. J'imagine donc que c'est un problème de tampon.  [...] Je suis d'accord avec Annaick_R. Essaye du tampon 1x ou 0.5x avec une concentration d'agarose de 0.8% sur un petit gel, voir même 0.6% comme dit plus haut. Ton kit de lambda digéré c'est un vecteur c'est bien ça Donc s'il est digéré tu devrais voir une bande assez haut sur ton gel (dans les 2kb environ) et tu peux laisser migrer moins longtemps.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de PCR

Des PCR qui n'ont rien à voir ont été faites pour tester l'enzyme (Phusion), le tampon de l'enzyme, l'eau et les dNTP, tout a très bien fonctionné.  [...] Nous sommes repartis d'une plasmide de cet été en faisant un gradient de température et de concentration et tout a fonctionner, donc nous l'avons fait avec nos ADNc (qui fonctionner cet été) et nous avons eu que des smears.  [...]

[Biologie Moléculaire] Problème de gel d'agarose

Quand tu modifies ton adn avec des enzymes les tampons d'activité contiennent souvent des produits qui pourrissent la migration, c'est surement ça.  [...] Je suis d'accord avec Mantos, soit tu as une concentration en sels trop importante, soit c'est que tu as dans ton tampon d'élution de ta colone des traces plus ou moins importantes de ta solution de lavage de la colone. Ca se produit notamment quand apres les lavages tu ne prends pas soint d'éliminer toute trace de liquide entre le tube collecteur et la colone.  [...]

Tampon de lyse hypotonique/hypertonique/isotonique

je dispose de 3 tampons de lyse mais je n'arrive pas à dire s'ils sont hypotoniques/isotoniques ou bien hypertoniques. pouvez vous m'éclairer svp. je sais qu'il y a une histoire de concentration en sels, et de mouvement d'eau mais je n'arrive pas à savoir qu'elle est la concentration intracellulaire.  [...] Tampon B = hypertonique donc sortie d'eau -. mais ce tampon me sert à lyser l'enveloppe nucléaire donc est ce vraiment hypertonique je n'arrive pas à visualiser comment ça casse la membrane nucléaire le noyau devient tout petit et finit par éclater aussi.  [...]

[Biochimie] Centrifugeuse différentes vitesses

Pour faire le dosage d'une enzyme la catalase, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 9000 g pour avoir la fraction mitochondriale (contient les mitochondries, les lysosomes et les peroxysomes).  [...] Pour faire le dosage d'une protéine Métalothionine, je prépare le tissu dans un tampon lyse. On me dit qu'il faut centrifuger à 30000 g pour avoir la fraction microsomale (contient les rybosomes et les réticulums endoplasmiques).  [...]

[Biochimie] Protocole de TP un peu flou

J'ai un tp de biochimie la semaine prochaine,je suis en train de le preparer j'ai compris le but qui est de tracer des spectres d'absorption de 3 acides aminés pour etablir leur coefficient.   [...] Reviendrai à. Prélever 2ml de la solution de Phe, puis l'introduire dans une fiole jaugée de 10ml et de compléter le volume jusqu'au trait de jauge avec la solution de tampon phosphate.  [...]

[Biotechnologie] Electrophorèse sur gel de polyacrylamide

Certaines boites vendent des gels d'AA prêt à l'emploie, notamment pour tout ce qui est gel à gradients mais cela ne s'adresse pas aux élèves du secondaire ni aux étudiants en fac et reste plutôt réservé à la recherche. Sinon il est relativement simple de les couler soit même à condition d'avoir le matériel et les différents tampons.  [...] bonjour, étudiant en 2eme année de licence, j'ai fait une electrophorèse sur gel de polyAA en présence de tampon tri veronal. Quelqu'un sait quel est le pH de ce tampon ce n'était pas marqué dans le protocole et j'en ai besoin pour le compte rendu.  [...]