• Forum - Quantité, Protéines, Concentration

[Biologie Moléculaire] gel 1D

pourtant après dosage la quantité de protéines semble suffisante j'ai par exemple 1.6µg/µl je ramène tout les échantillons à cette concentration, j'ai engagé une plus grande quantité de protéine 65µg. j'ai vérifié les pH des tampon tris pour les deux gels (concentration et séparation) je travaille avec la même source.  [...] je voudrai savoir aussi si le fait de d'augmenter la tension un peu peut provoqué ça je fais ça parfois quand je viens le matin pour activer la migration, mais j'ai toujours eu l'habitude d'avoir de beau gels.   [...]

[Biochimie] purification protéine

Je travaille sur la purification de protéines. Lorsque l'on effectue la précipitation par le sulfate d'ammonium, on récupère bien le culot (on cherche donc à faire précipiter notre protéine d'intérêt alors que j'ai écrit l'inverse dans mon cours). J'ai un petit doute.  [...] l'addition du Sulfate d'ammonium à forte concentration diminue la quantité d'eau disponible pour solvater les protéines.Ces dernières vont se précipiter.  [...]

[Biologie Moléculaire] PM de ma protéine trop grand

Que ce soit bien la GSK-3ß reste à vérifier, mais sachez qu'en WB on parle de PM apparent. En effet la distance de migration dépend de plusieurs facteurs qui peuvent varier entre les extraits protéiques expérimentaux et le marqueur commercial. quantité de protéines, concentration en sels, etc.  [...] L'idéal pour être sur est de disposer d'une protéine recombinante, d'extraits ou la protéine est inhibée (siRNA, animaux KO, etc) ou surexprimée.  [...]

[Biochimie] Dosage des protéines

Si vous considérez les chiffres absolus qui sortent du spectro, ce n'est pas une quantité, c'est une concentration qu'il faut rapporter au volume de protéines à chaque étapes. Normalement le nombre total devrait diminuer, si il augmente c'est que vous avez un souci dans la conduite de vos manip.  [...] Oui mais si vous faites une dialyse après purif vous augmenterez la concentration (sans augmenter la quantité on est d'accord).  [...]

Production protéine recombinante E.coli

Aprés une première dialyse je dose ma quantité de protéines et j'ai une concentration de 2,5mg/ml ensuite à la dernière dialyse j'ai une concentration de 0,6mg/ml. J'observais des agrégats que j'ai éliminé par centri.  [...] Pourquoi la proteine s'agrége c'est seulement cela qui explique la différence de concentration, la technique de dialyse est-elle efficace sinon pourrais-je utiliser une autre technique comme la filtration.  [...]

[Biochimie] Concentré une protéine recombinante

Pour concentrer les protéines, il existe des filtres de porosité donnée (je ne sais pas s'ils descendent en-dessous de 10 kDa), qui permettent d'éliminer la quantité voulue de tampon tout en retenant la protéine. On a donc bien une augmentation de la concentration de la protéine.  [...] Sinon, tu pourrais aussi fixer ta prot sur une colonne (échangeuse d'ions par exemple). Comme ça tu enlèves ton imidazole pendant le dépôt et le lavage, et tu concentres ta protéine pendant l'élution. Ca peut parfois être plus rapide que l'ultrafiltration.  [...]

[Biochimie] facteur de purif et rendement

le facteur de purification c'est la concentration finale de ton produit sur la concentration initiale. Par ex ta vitamine C est à la concentration de 1 mg/mL dans ton jus de citron, tu obtiens une solution à 100 mg/mL à la fin de ta purif. tu as donc réussi concentrer 100 fois la vitamine C, ton facteur de purification est donc de 100.  [...] L'activité spécifique, c'est l'activité enzymatique par mg de protéines. C'est donc assimilable à une concentration d'activité enzymatique. Au final, rien de bien différent avec l'exemple de la vitamine C énoncé par Mrikzik. Mais étant en présence d'une enzyme, on raisonne en terme d'activité et non de quantité d'enzyme.  [...]

[Biologie Moléculaire] Preparation d'une gamme étalon ou standard pour PCRq

Car c'est surement une mauvaise lecture de ma part, mais en te lisant j'ai eu l'impression que tu voulais une gamme pour relier directement a une quantité en ng ou nmol initiale de ton gène, un peu comme en biochimie on prépare une gamme de BSA pour obtenir une concentration de protéines.  [...] Donc meme si tu as une séquence de ton gène en plasmide, que tu l'amplifie dans des bactéries, que tu l'extrait des bactéries, pose sur gel puis extrait du gel ta bande d'intéret, la purifie puis quantifie, tu auras la concentration que tu pourras diluer et te servir en qPCR, mais la meme quantité de transcrits, sur de l'environnemental ne donnera pas les mêmes résultats (ou alors il ne faut pas que tu utilise des primers dégénérés sur ton témoin car pour une meme quantité de primers tu n'auras pas le même taux de fixation, mais même dans ce cas, ton efficacité E ne sera pas la meme entre ton standard et ton echantillon).  [...]

mitose et taille du cytoplasme

Si je me souvient bien de mes cours, il y a en effet une protéine qui est produite tout au long du cycle cellulaire, afin que sa concentration dans le cytoplasme reste constante. Donc sa quantité (en nombre, et pas en concentration) est proportionnelle à la taille de la cellule.  [...] Les récepteurs de cette protéines sont par contre présents en un nombre très stricte dans la cellule, et chacun de ces récepteurs doivent être occupés pour qu'une mitose puisse débuter. Donc en conclusion, oui, tant qu'une cellule n'a pas atteint un certain volume, il n'y a pas de mitose possible.  [...]

[Biochimie] dot plot et overlay

Pourriez vous m'aider à retrouver un protocole complet sur l'overlay et la concentration de protéines que je dois déposer.  [...] Si tu es riche en matériel, tu peux commencer par faire des tests par toi même, par exemple en faisant une gamme de quantité a déposer, puis une gamme de concentration de ta solution de protéine, sans oublier les contrôles adéquats.  [...]