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Electrophorèse sds-page de la MMP2

sur le gel Page vous vouliez voir les MMP au bleu de coomassie ou toutes les protéines j'imagine que c 'est pour normaliser la quantité de MMP par rapport au total.  [...] Le bleu de coomassie est un colorant très peu sensible, il colore certes les protéines mais on ne voit à l'oeil que les bandes principales. Surtout que dans un surnageant cellulaire, la quantité de protéine est pas suffisamment importante pour voir des bandes. Peut être avec du nitrate d'argent.  [...]

Moustiques résistants

Comme pour le WB, tu peux parfois comparer les bandes pour en déduire des quantités, ou dans tous les cas, la présence/absence du gène choisi.  [...] d'après les docs 2 et 3, la synthèse des protéines de type A se fait même en présence de très peu de gènes A, alors que pour la protéine B4, le gène B4 doit être présent en grande quantité.  [...]

[Biochimie] qualité protéines

Je réalise des tests de vieillissements tissulaires et regarde la dégradation au niveau ARN et Protéines.  [...] En ce qui concerne les Protéines, après extraction sur une même masse de tissus je ne vois pas de différence au niveau quantité (je m'y attendais) ni au niveau visuel (gel coloré au bleu de Comassie / bandes majoritaires). Il existe-t-il une protéine témoin de qualité à mettre en évidence en Western.  [...]

[Biochimie] Comment lire et interpréter un Immunoblot ?

La différence d'exposition permet de voir si de nouvelles bandes apparaissent. Par exemple, tu peux voir sur le temps d'exposition long des bandes qui sont invisibles sur le temps d'exposition court (car la quantité de protéines correspondant a cette bande est faible, voir figure 4 gel E).  [...] Les bandes d'actine ont un rôle de témoin. Par exemple, pour pouvoir comparer les deux conditions dans le gel A il faut que les deux bandes d'actine est la même intensité (ce qui veut dire que les quantités de protéines sont a peu près égales entre les deux conditions).  [...]

Techniques utilisées en lab de biomol - Page 2

En fait, j'ai jamais bien compris l'utilité de cette expérience (Coomassie). Quand il manque des bandes dans certains puits, c'est nickel. Mais souvent on n'est pas très sur qu'elles manquent vraiment... Ou alors on n'est pas sur d'avoir la même quantité de protéines dans tous les puits.  [...] C'était pour détecter d'éventuelles différences dans les protéines du cerveau entre des souris mutante et WT. Effectivement, on a bien observé toute une région où les bandes étaient plus claires voire absentes (= une famille d'isoformes absents, finalement).  [...]

[Biochimie] Electrophorèse SDS page

Qu'est-ce que tu déposes comme échantillon sur tes gels. protéine recombinante (j'en doute), extrait cellulaire Avec quoi tu colores. bleu de Coomassie, Simply Blue,... Ce que tu appelles bandes verticales, ce ne serait pas plutôt des bandes horizontales,... Essayes d'être plus précis.  [...] Pour les bandes en haut. on s'accorde à dire que ça serait dû à un manque de dénaturation des protéines. tu peux donc augmenter le pouvoir réducteur de ton tampon de charge (augmenter alors la quantité de b-mercapto ou de DTT) et chauffer plus longtemps.  [...]

Electrophorèse acétate de cellulose

Je fais appel à vous car je souhaite réaliser une électrophorèse sur acétate de cellulose, avec du blanc d'oeuf dilué, afin d'en séparer les différentes protéines (ovalbumine...). Mais je souhaite être au clair sur le principe général de la méthode.  [...] Du coup, la migration se ferait à la fois selon la taille et la charge des protéines Ou, si l'on considère que leur charge est la même, uniquement en fonction de leur taille.  [...]

[Biochimie] Quantifier un western blot

Il existe des appareils spécialisé (genre chemigenius), qui permette d'acquérir des images jusqu'à 65 000 niveaux de gris, couplé au logiciel genetool pour faire une analyse automatique (identification des pistes et des bandes, determination de la taille/poids moléculaire par rapport à une marqueur, détermination de la quantité par rapport à une gamme standard).  [...] Attention je n'ai pas dis que l'ELISA était super pratique et super simple à mettre en oeuvre. Je dis juste que si l'on veut vraiment quantifier des protéines c'est le moyen le plus convainquant. La quantification des bandes de WB c'est jamais terrible.  [...]

[Biochimie] Paramètres western blot

L'important n'est pas le voltage pour séparer les deux bandes mais la distance de migration. Le voltage est surtout important pour la résolution des bandes. Je faisais arriver la bande de 60 kDa du marqueur de taille à 1 cm du bas du gel car j'avais une protéine à 60 kDa qui m'intéressait.  [...] Mais si tu n'as que ces deux protéines à regarder, n'hésites pas à faire sortir des bandes de l'ordre de 100 kDa, tes deux formes seront d'autant mieux séparées.  [...]

[Biochimie] Migration Western Blot

Le front de migration n'est pas net (plus une sorte de flou bleu qu'une bande), et les protéines ne se séparent pas bien. En Coomassie le bas du gel ne présent pas de belles bandes discrètes. Pourtant le marqueur lui migre très bien.  [...] As tu essayé de faire un nouveau tampon de chargement le tampon de chargement joue une rôle important dans la migration. Peut être que les petites protéines sont présentes en très faibles quantité ce qui fait qu'on ne les voit pas sur la fin de gel (explication au bol, je précise).  [...]