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[Biotechnologie] Bloquer l'expression d'un gène chez la levure

Sinon y'a encore un truc qui me vient à l'esprit mais je ne suis pas certain que ce soit très rigoureux. tu n'inactive pas le gène endogène mais tu transfectes avec un plasmide surexprimant à fond le gène muté. La protéine mutée va rentrer en compétition avec la protéine sauvage et même si le gène sauvage est toujours actif tu va avoir de l'inhibition à cause de la grosse quantité de protéine mutée... Mais après ca dépend aussi du gène.  [...] je veux induire l'expression de ma proteine chez la levure pichia normalement cette proteine doit etre excreté hors de la levure.j'ai fait un preculture dans le BMGY et apres dans le BMMH( 0.5% methanol) à 30°c.  [...]

allèle

50/50. Cependant l'individu n'aura aucun phénotype pathologique puisque la quantité de protéine sauvage suffira au bon fonctionnement de l'individu, et surtout, la protéine mutante n'interférera pas avec la fonction de la protéine sauvage. le gène CFTR muté est récessif.  [...] oui l'expression d'un gène récessif est toujours masqué par l'expression d'un gène dominant, mais comme l'a dit Flyingbike, il n'y'a pas de lien avec la quantité de protéine produite. un gène peut être dominant alors que la quantité de protéine produite par ce gène la est plus faible que la quantité de protéine produite par le gène récessif, sa dépend des gènes, des fois il suffit que la protéine muté soit présente pour que la personne ait une maladie que ce soit en grande quantité ou pas, on dira alors que le gène qui code pour cette protéine la est dominant.  [...]

[Génétique] Fonctionnement biochimique dominance et récessivité des allèles

ca dépend des cas. Par exemple, avec 50% de protéine sauvage et 50% mutée, la portion sauvage suffit a maintenir le phénotype sain. récessivité. Dans un autre cas, par exemple lorsque la protéine doit se multimériser, les multimères contenant aussi la forme mutée ne sont plus fonctionnels malgré que la forme sauvage soit exprimée. dominance.  [...] il y a des mutations qui modifient l'expression des gènes. Je ne connais pas d'exemple ou une protéine mutée modifie l'expression de la protéine sauvage.  [...]

Mutagénèse dirigée

J'ai la séquence d'un gène codant pour une protéine sauvage et j'ai la séquence du gène codant pour la protéine mutée pour une espèce A. On sait donc qu'aux alentours de la position 200 on a un changement d'un acide aminé entre la forme sauvage et mutée.  [...] Dans un premier temps j'envisage d'aligner les séquences protéiques des 2 protéines sauvages et identifier l'acide aminé qu'il faudra modifier.  [...]

[1ere S] L'importance de l'électrophorese

Oui bien sûr si c'est la protéine sauvage, et si le marqueur est le même. Ce que l'on observe par l'électrophorèse c'est la taille de la protéine, et sauf exeptions, la taille de 2 protéines sauvages chez 2 indivius différents, sont identiques.  [...] Non. Je parle en fait de protéines sauvages et mutantes, qui n'auraient pas la même taille. Certaines mutations provoquent la terminaison de la traduction plus tôt que prévue à cause de l'introduction d'un codon STOP. Donc la protéine mutante serait plus courte que la protéine sauvage.  [...]

mutation génétique

il peut arriver énormément de choses à la protéine. La transcription/traduction se déroulera normalement, et par exemple, si tu avais AAA CCC GGG AAA TTT (...) comme séquence sauvage, et qu'après mutation tu obtiens AAA CC GGG AAA TTT (...), tu auras donc comme codons. AAA CCG GGA AAT TT (...).  [...] On pourrait aussi observer l'apparition d'un codon STOP prématuré, donc la protéine mutante sera dans ce cas plus courte que la protéine sauvage.  [...]

[Biochimie] Immunoblotting, anticorps

l'immunoblotting est juste une des techniques utilisées pour arriver à ces conclusions (par visualisation de l'intensité sur SDS PAGE ), donc à priori je ne vois pas le lien avec une protéine endogène.  [...] la protéine existe bien chez la levure sauvage si oui, pour vérifier que la construction de la protéine mutée ou sauvage s'exprime bien, il faut pouvoir la différencier de celle que la levure produit naturellement.  [...]

[Biologie Cellulaire] Dominant négatif

Pour le déroulement exacte d'une manip, tout dépend de la protéine que tu étudies (voie de signalisation, transcription, structure, etc...).  [...] Sinon pour clarification, pour 'éteindre' une protéine comme tu le dis, des siRNA permette de supprimer la protéine complétement. Un dominant négatif ne fait que bloquer une fonction de la protéine, tout en la maintenant physiquement présente dans la cellule.  [...]

[Evolution] Positions actuelles sur la théorie de l'évolution

Ce modèle présente aussi un avantage. une mutation a une forte probabilité de faire perdre sa fonction a une protéine. Dès lors, cela pourrait expliquer qu'en rendant inopérantes les protéines bloquant certains gènes elles pourraient produire rapidement des évolutions positives.  [...] D'ailleur j'entend souvent dire que les mutations n'améliorent jamais une protéine, eh bien c'est faux. il est tout a fait possible d'identifier en laboratoire des mutants qui fonctionnent mieux que la protéine sauvage.  [...]

Mutations silencieuses

Moi je dirais plutôt le contraire. une mutation silencieuse est une mutation (dans ce cas) dans une séquence intronique qui n'est pas traduite car ayant été épissé pendant la maturation de l'ARNm.. Du coup, la protéine ne comporte pas de modif dans sa séquence ni dans sa structure.  [...] A partir du moment ou la proteine ne presente plus la meme activité, localisation ou stabilité que la proteine sauvage on ne peut pas parler de mutation silencieuse.  [...]